【摘要】：背景真菌性角膜炎是一種由致病真菌感染引起的致盲率極高的感染性角膜病。近幾年來真菌性角膜炎患病率已上升至感染性角膜病的首位(占51%-70%)。我省是一個(gè)農(nóng)業(yè)大省,真菌性角膜炎的發(fā)病率較高,降低真菌性角膜炎致盲性的研究具有重要意義。隨著生活水平的提高,含糖食品無處不在,尤其是多種精加工的食品和兒童含糖飲料中,糖的比例普遍較高。已有多項(xiàng)相關(guān)研究表明,過多食用高糖食品影響了正常的糖代謝,給機(jī)體帶來多種危害。盡管眾多研究結(jié)果表明高糖是引發(fā)機(jī)體多種疾病的重要致病因素,但同時(shí),很多前沿研究結(jié)果也表明,高糖飲食也可能起到積極作用。因此,本項(xiàng)研究旨在探索高糖飲食對角膜真菌感染病程的影響,是積極的促進(jìn)修復(fù)作用,還是延遲愈合的不利因素,這是我們本課題提出并待解決的問題。通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果,對真菌性角膜炎感染后用藥及治療起到一定指導(dǎo)作用。目的探究高糖飲食對小鼠真菌性角膜炎病程的影響。方法選取健康無眼疾的雄性C57BL/6J小鼠78只,SPF級(jí),周齡8-12周。隨機(jī)分為高糖飲食組和模型對照組,每組78只眼(n=78),高糖飲食組小鼠給予濃度為10%果糖溶液,模型對照組小鼠使用正常飲用水喂養(yǎng),每兩天同一時(shí)刻定時(shí)測量兩組小鼠的體質(zhì)量和血糖,分別喂養(yǎng)滿10天之后,開始建立小鼠雙眼真菌性角膜炎模型。建模成功后應(yīng)用裂隙燈分別在24h、36h、48h、72h、96h、120h、144h、168h各時(shí)間點(diǎn),對小鼠眼表進(jìn)行觀察和拍照,并對角膜病變嚴(yán)重程度進(jìn)行臨床評(píng)分。真菌性角膜炎建模后24h、36h、48h、72h、96h、120h、168h,各時(shí)間點(diǎn)分別處死4只小鼠,修剪分離角膜組織并進(jìn)行角膜整鋪片免疫熒光染色,應(yīng)用雙光子激光掃描顯微鏡對角膜緣、旁中央及中央角膜進(jìn)行掃描拍照,測定每個(gè)角膜內(nèi)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的總體積。制作病理切片并進(jìn)行HE染色和PAS染色,觀察不同時(shí)間點(diǎn)角膜炎癥及載菌量的變化。使用酶聯(lián)免疫吸附劑法(ELISA)測定小鼠角膜中的IL-1β量。結(jié)果給予高糖飲食和正常飲食后14天中,高糖飲食組與模型對照組兩組小鼠體質(zhì)量在各時(shí)間點(diǎn)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;高糖飲食組與模型對照組兩組小鼠血糖水平在各時(shí)間點(diǎn)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在模型建立成功后各時(shí)間點(diǎn),高糖飲食組臨床評(píng)分均明顯高于模型對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P(27)0.05)。高糖飲食組角膜穿孔率80.0%,模型對照組角膜穿孔率43.3%,兩組相比差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ~2=8.531,P=0.003)。建立真菌性角膜炎模型后24h、48h、72h、120h、168h,高糖飲食組中性粒細(xì)胞總體積明顯高于模型對照組,各時(shí)間點(diǎn)兩組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P(27)0.05)。對巨噬細(xì)胞進(jìn)行統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),自72h后巨噬細(xì)胞明顯升高,真菌性角膜炎模型建立后72h、96h、120h、168h時(shí)間點(diǎn),高糖飲食組巨噬細(xì)胞總體積明顯高于模型對照組,各時(shí)間點(diǎn)兩組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P(27)0.05)。角膜組織病理學(xué)檢查顯示,相較于模型對照組小鼠角膜,高糖飲食組小鼠角膜感染真菌性角膜炎后,炎癥反應(yīng)程度更嚴(yán)重,角膜組織破壞發(fā)生更早且嚴(yán)重程度更高。真菌性角膜炎模型建立成功后24h、48h,高糖飲食組IL-1β含量明顯高于模型對照組IL-1β含量(P(27)0.05)。結(jié)論高糖飲食加重真菌性角膜炎感染的嚴(yán)重程度,增強(qiáng)中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化,促進(jìn)IL-1β的分泌。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R772.21
【圖文】：

膜緣可見大量前房積膿，呈現(xiàn)出真菌性角膜炎最常見的臨床表現(xiàn)。72h 后兩組均開始出現(xiàn)角膜后彈力層膨出和新生血管。高糖飲食組和模型對照組均在 120h 病變最為嚴(yán)重，嚴(yán)重者可出現(xiàn)角膜穿孔和角膜萎縮，高糖飲食組穿孔數(shù)明顯高于模型對照組。在相同時(shí)間點(diǎn)，小鼠感染真菌性角膜炎 24h、36h、48h、120h、168h時(shí)，高糖飲食組均較模型對照組小鼠角膜感染真菌性角膜炎后臨床評(píng)分更高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000，0.011，0.000，0.000，0.002 < 0.05）。 見圖 1和表 3。表 3：兩組小鼠不同時(shí)間點(diǎn)角膜臨床評(píng)分注：F分組= 98.755，P = 0.000；F時(shí)間= 212.05，P = 0.000。*與模型對照組相比，P 0.05

圖 2：不同時(shí)間點(diǎn)兩組小鼠角膜臨床評(píng)分注：Con 示模型對照組，HFrD 示高糖飲食組3.3 高糖飲食對真菌性角膜炎小鼠穿孔率的影響兩組小鼠角膜均在真菌性角膜炎感染后 72h 開始出現(xiàn)穿孔，其中高糖飲食組小鼠角膜穿孔 40 只，未穿孔 10 只，高糖飲食組穿孔率為 80%；模型對照組小鼠角膜穿孔 21 只，未穿孔 29 只，穿孔率為 42%。兩組之間比較采用卡方檢驗(yàn)，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=15.174，P = 0.000），見表 4。表 4.建模后兩組小鼠角膜穿孔率的比較（n=50）分組是否穿孔 穿孔率 n（%）與真菌組比較χ2穿孔 不穿孔值和 P 值高糖飲食組 40 10 80% χ2=15.174模型對照組 21 29 42%P=0.000

結(jié)果中炎癥細(xì)胞的影響，我們通過對真菌感染后的小鼠角膜中性粒細(xì)胞進(jìn)行定量。使用 FITC/Gr-1 抗體對角膜內(nèi)中性粒細(xì)胞進(jìn)行染色標(biāo)記，后計(jì)量統(tǒng)計(jì)中性粒細(xì)胞數(shù)量，以此評(píng)估真菌性角膜炎病程中炎癥反應(yīng)水平。高糖飲食組與模型對照組中性粒細(xì)胞浸潤均在 36h 到達(dá)高峰，自 120h 開始至 168h，中性粒細(xì)胞數(shù)量逐漸降低。高糖飲食組 48h 角膜病灶中央有少量中性粒細(xì)胞浸潤，隨著時(shí)間的增加越來越嚴(yán)重，其中 120h 最為嚴(yán)重，可見大量中性粒細(xì)胞在病灶中央?yún)^(qū)域浸潤。高糖飲食組在 24h、36h、48h、72h、96h、120h、168h 各個(gè)時(shí)間點(diǎn)中性粒細(xì)胞表達(dá)均多于模型對照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均為 P 0.05），見表 5 與圖 4。表 5：不同時(shí)間點(diǎn)兩組中性粒細(xì)胞浸潤體積（ ±s）（n=6）

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本文編號(hào)：2766594