【摘要】：目的:通過摘除淚腺、哈氏腺及第三眼瞼建立淚液生成不足型兔干眼模型,評價重組人溶菌酶滴眼液對干眼模型眼表的影響,并探索其作用機制。方法:健康新西蘭兔36只,以左眼為手術眼建立干眼模型,右眼不做任何處理。分別在手術前、手術后7d及14d進行Schirmer I試驗、淚液蕨樣變試驗及角膜熒光染色。術后14d隨機分為模型組,基礎液組,低、中及高濃度溶菌酶滴眼液組,玻璃酸鈉組,將模型對照組的右眼設為正常對照組,共7個組,42只兔眼。模型對照組不做任何治療;基礎液組予以基礎液(含0.75%NaCl的5 mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH6.5)),低、中及高濃度溶菌酶滴眼液組分別依次給予含0.75mg/ml、1.50mg/ml及3.00mg/ml重組人溶菌酶滴眼液(溶菌酶+基礎液),玻璃酸鈉組予以玻璃酸鈉滴眼液(商品名“海露”),各給藥組均每日點眼3次、每次2滴,持續(xù)點眼28d。分別在給藥前、給藥后7d、14d、21d及28d進行Schirmer I試驗、淚液蕨樣變試驗及角膜熒光染色。給藥28d后光鏡觀察角膜、結膜病理學改變,免疫組化法檢測TGF-β1及TNF-α表達,SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳法檢測滴加及未滴加溶菌酶的兔眼房水中溶菌酶含量。結果:1.術后第14d,模型組動物角膜結膜干燥,Schirmer I試驗值均5mm/5min(右眼自身對照均10mm);淚液蕨樣變試驗結晶數量少,間隔大,且形狀不規(guī)則;熒光素鈉染色見角膜點、片狀染色。統(tǒng)計學結果表明,與正常組相比,模型組動物淚液分泌量顯著降低(P0.01)但淚液結晶評級及角膜熒光素染色評分顯著升高(P0.01),表現了淚液“量”和“質”的顯著變化,與既往文獻報道的干眼癥動物模型特征基本類似,表明模型復制成功。2.給藥7d,高濃度溶菌酶滴眼液組Schirmer I值最先較模型組顯著升高(P0.05);給藥14d,中、高濃度溶菌酶滴眼液治療組,玻璃酸鈉組Schirmer I值均較模型對照組、基礎液組顯著升高(P0.05/0.01);給藥28d,低、中及高濃度溶菌酶滴眼液組,玻璃酸鈉組淚液分泌量均比模型對照組顯著升高(P0.05/0.01)。隨著治療時間的延長,各用藥組淚液結晶形態(tài)也逐漸呈間隔較小的羊齒狀結晶,至給藥28d,低、中及高濃度溶菌酶滴眼液組、玻璃酸鈉組4個組結晶評級較模型組均明顯降低(P0.05),以Ⅰ級和Ⅱ級為主;模型對照組、基礎液組雖較0d有所改善,但仍以Ⅲ級和Ⅳ級為主。用藥7d,高濃度溶菌酶滴眼液組最先較模型對照組熒光素染色評分降低(P0.05);給藥14d,低、中及高濃度溶菌酶滴眼液組、玻璃酸鈉組熒光素染色評分均比模型對照組顯著降低(P0.05/0.01);給藥28d,低、中及高濃度組溶菌酶滴眼液組,玻璃酸鈉組熒光素染色評分均比模型對照組和基礎液組顯著降低(P0.05/0.01)。但以上指標在低、中及高濃度溶菌酶滴眼液組、玻璃酸鈉組這4個組間兩兩比較無明顯差異。3.與正常組相比,模型組TNF-α及TGF-β1表達均顯著升高(P0.01)。與模型組相比,低、中及高濃度溶菌酶滴眼液組,以及玻璃酸鈉4組動物TNF-α的表達顯著降低(P0.05)而TGF-β1表達顯著升高(P0.05),且較玻璃酸鈉組相比,中及高濃度溶菌酶滴眼液組TGF-β1表達顯著升高(P0.05),高濃度溶菌酶滴眼液組TNF-α表達顯著降低(P0.05)。4、與正常組相比,模型組房水溶菌酶含量均明顯降低(P0.01);雖然溶菌酶滴眼液治療組結果為陽性的數量多于模型組,但差異無統(tǒng)計學意義。結論:1.摘除淚腺、哈氏腺及第三眼瞼可以成功建立穩(wěn)定持續(xù)的兔淚液生成不足型干眼模型。2.分泌不足型干眼動物房水中溶菌酶濃度顯著降低,補充重組人溶菌酶滴眼液可有效緩解干眼癥狀,促進眼表損傷修復,且在關鍵評價指標(淚液分泌量、淚液結晶形態(tài))的恢復速度上明顯優(yōu)于臨床已應用的治療藥物玻璃酸鈉滴眼液。3.重組人溶菌酶滴眼液在緩解和改善干眼癥狀的同時,可發(fā)揮抑制炎性反應的重要作用,提示其作用機制可能與其對炎性反應的抑制作用相關。4.在人工淚液中添加人工合成的溶菌酶,可顯著提升對干眼的治療效果,本研究為新作用特點的干眼治療藥物研發(fā)提供了新的思路。
【學位授予單位】：軍事科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R777.34
【圖文】：

圖 1.1 兔淚液生成不足型干眼模型建立過程A：全身麻醉后剪除睫毛；B：摘除淚腺；C：摘除第三眼瞼；D：摘除哈氏腺；E：暴露球結膜后用 30%三氯乙酸灼燒球結膜；F：從左至右依次為摘除的第三眼瞼、哈氏腺、淚腺。1.4 干眼模型的評價指標及方法分別在手術前、手術后 7d 及 14d 進行 Schirmer I 試驗、淚液蕨樣變試驗及角膜熒光染色。所有檢查均由同一人在相同的時間段、地點、溫度、亮度、濕度環(huán)境下進行。1.4.1 Schirmer I 試驗在中等濕度和亮度的室內環(huán)境下進行。如圖 1.2 所示，取一條 5×35mm 濾紙，在首端 5mm 處反折，置于下結膜囊中外 1/3 交界處，5 min 后取出紙條（兔通過眨眼運動有可能擠出濾紙條，注意測量時間內不要讓濾紙條離開眼眶），根據刻度讀取濾紙濕潤部分試紙長度并記錄。取連續(xù)測量 3 次的平均值為 chirmer I 試驗結果。正常情況下濾紙濕潤長度大于 10mm/5min。

SchirmerI試驗

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本文編號：2717604