發(fā)布時間：2020-05-23 03:43

【摘要】：鼻咽癌是來源于鼻咽粘膜上皮的一種高度惡性上皮性腫瘤,是東南亞地區(qū)尤其是中國兩廣地區(qū)的高發(fā)性腫瘤。目前研究表明,鼻咽癌的發(fā)病可能與基因易感性、EB病毒感染、特定飲食習慣等因素有關(guān)。鼻咽癌對放射治療敏感度較高,因此放療是早期鼻咽癌的主要治療手段。然而鼻咽癌極易出現(xiàn)放療抵抗,化療因此成為必不可少的輔助治療手段。癌基因與抑癌基因的失衡是腫瘤發(fā)生及進展的重要基礎(chǔ)。VPS33B全稱為vacuolar protein sorting 33 homolog B(yeast),其編碼蛋白主要參與蛋白排序與液泡轉(zhuǎn)運。目前關(guān)于VPS33B基因的報道大部分集中于關(guān)節(jié)攣縮、腎功能不全和膽汁淤積綜合征(ARC syndrome)和巨核細胞與血小板α-顆粒的生物合成障礙等疾病上。NESG1官方名稱為CCDC19,該基因特異性的表達于鼻咽和氣管纖毛柱狀上皮。已有多項研究證實該基因在鼻咽癌及肺腺癌等腫瘤中發(fā)揮抑癌基因作用。但其對鼻咽癌抑癌作用的深入機制尚未闡明。在本次研究中,我們研究了 VPS33B與NESG1 相互作用調(diào)控EGFR/PI3K/AKT/c-Myc/p53/miR-133a-3p環(huán)路從而抑制鼻咽癌增殖及促進其對5-氟尿嘧啶化療敏感性的機制,為鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的分子機制研究提供新思路,并為鼻咽癌治療帶來了新的靶標。研究內(nèi)容與方法1.VPS33B通過EGFR/PI3K/AKT促進鼻咽癌對5-氟尿嘧啶化療敏感性。利用Western Blot實驗進一步驗證VPS33B對PI3K/AKT信號通路相關(guān)因子調(diào)控機制并利用細胞毒性實驗及裸鼠生存模型驗證VPS33B促進鼻咽癌對5-Fu化療敏感性。2.miR-133a-3p抑制鼻咽癌細胞增殖及其分子機制。(1)功能實驗檢測miR-133a-3p對鼻咽癌增殖的影響;(2)機制實驗檢測miR-133a-3p所調(diào)控的信號通路及其靶基因。3.c-Myc/p53通過調(diào)控EGFR/PI3K/AKT信號通路抑制miR-133a-3p對鼻咽癌增殖的抑癌作用;(1)生物信息學預(yù)測miR-133a-3p及p53啟動子結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子;(2)ChIP、EMSA及雙熒光素酶報告實驗檢測其預(yù)測轉(zhuǎn)錄因子是否結(jié)合并調(diào)控轉(zhuǎn)錄;(3)檢測c-Myc/p53是否調(diào)控miR-133a-3p;4.VPS33B誘導(dǎo)miR-133a-3p調(diào)節(jié)EGFR/PI3K/AKT/c-Myc/p53形成負性調(diào)控環(huán)路(1)檢測VPS33B是否調(diào)控miR-133a-3p表達利用qPCR實驗檢測過表達VPS33B對鼻咽癌細胞中miR-133a-3p表達量的改變;(2)功能及機制實驗驗證EGFR或EGF介導(dǎo)VPS33B的功能及其相關(guān)信號通路;5.VPS33B與NESG1相互作用和誘導(dǎo)(1)驗證VPS33B與NESG1是否相互作用;(2)功能及機制實驗驗證VPS33B與NESG1相互的調(diào)控關(guān)系;6.LMP-1及尼古丁通過PI3K/AKT/c-Jun信號通路抑制VPS33B表達(1)檢測LMP-1及尼古丁是否調(diào)控VPS33B表達;(2)機制實驗分析LMP-1及尼古丁如何調(diào)控VPS33B表達;7.VPS33B在鼻咽癌組織中的表達及其臨床相關(guān)性分析(1)利用免疫組化檢測VPS33B及NESG1在鼻咽及鼻咽癌組織中的表達情況;(2)VPS33B與NESG1的相關(guān)性分析及VPS33B的臨床相關(guān)性分析。結(jié)果及結(jié)論1.VPS33B通過EGFR/PI3K/AKT信號通路促進鼻咽癌對5-氟尿嘧啶的化療敏感性。2.miR-133a-3p通過靶向EGFR/PI3K/AKT信號通路抑制鼻咽癌細胞增殖;3.VPS33B調(diào)控的EGFR/PI3K/AKT/c-Myc/p53/miR-133a-3p負反饋環(huán)路抑制鼻咽癌增殖;4.VPS33B通過EGFR/PI3K/AKT/c-Jun信號通路與NESG1相互作用并調(diào)控上述信號環(huán)路;5.LMP-1及尼古丁通過PI3K/AKT/c-Jun信號通路抑制VPS33B表達;6.VPS33B在鼻咽癌中低表達,但其高表達是鼻咽癌臨床預(yù)后良好的指標。
【圖文】：

邐第一章ＶＰＳ３３Ｂ促進鼻咽癌對５－氟尿嘧啶化療敏感邐逡逑為４ｐｇ／ｇ，給藥方式為腹腔注射。給藥時間間隔為４天。對照組使用生理鹽水腹逡逑腔注射。計算裸鼠生存時間及稱量其體重。逡逑二結(jié)果逡逑１．熒光定量ＰＣＲ及ＷＢ檢測穩(wěn)定過表達鼻咽癌細胞株ＨＯＮＥ１－ＶＰＳ３３Ｂ和逡逑ＳＵＮＥ１－ＶＰＳ３３Ｂ中ＶＰＳ３３Ｂ的表達情況逡逑選取生長狀態(tài)良好的ＨＯＮＥ１－ＶＰＳ３３Ｂ和ＳＵＮＥ１－ＶＰＳ３３Ｂ細胞提�。遥危铃义喜⒛孓D(zhuǎn)錄，以進行熒光定量ＰＣＲ以及Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ檢測所選細胞株內(nèi)ＶＰＳ３３Ｂ逡逑的過表達程度。結(jié)果顯示所選細胞株中ＶＰＳ３３Ｂ表達量均明顯上調(diào)，，證明逡逑ＶＰＳ３３Ｂ慢病毒載體轉(zhuǎn)染成功，適合進行下一步實驗。檢測結(jié)果如下所示：逡逑

第一章邋ＶＰＳ３３Ｂ促進鼻咽癌對５－氟尿嘧啶化療敏感胞中ＥＧＦＲ、ｐ－ＰＩ３Ｋ、ｐ－ＡＫＴ表達量下調(diào)，ＰＩ３Ｋ＆ＡＫＴ總蛋白表達而其下游ｃ－Ｍｙｃ、Ｅ２Ｆ１、ＣＣＮＤ１表達下調(diào)，ｐ５３表達上調(diào)。抑制ＶＰＳ３３察到相反結(jié)果。該結(jié)果表明ＶＰＳ３３Ｂ通過ＥＧＦＲ／ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ調(diào)控其下、Ｐ５３、ｃ－Ｊｕｎ等細胞周期關(guān)鍵因子在鼻咽癌細胞中發(fā)揮抑制增殖的作用果如下所示：逡逑ＮＣ邋ＶＰＳ３３Ｂ邋ＮＣ邋ＶＰＳ３３Ｂ邐ＮＣ邋ＶＰＳ３３Ｂ邋ＮＣ邋ＶＰＳ３３Ｂ逡逑
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R739.63

【相似文獻】

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1 廖維婷;陳文勇;;鼻咽癌相關(guān)基因的研究進展[J];中醫(yī)耳鼻喉科學研究;2011年02期

2 ;鼻咽癌標志物臨床應(yīng)用專家共識[J];中國癌癥防治雜志;2019年03期

3 黎騁;鄭裕明;郭俊宇;馬麗萍;陸愛英;湯敏中;吳惠惠;蔡永林;;鼻咽癌組織中多聚免疫球蛋白受體的表達及意義[J];山東醫(yī)藥;2015年46期

4 葉浩昕;范紹

本文編號：2677092