【摘要】：目的:青光眼因其漸進性的視神經(jīng)損傷和視野缺損長期位于難以逆轉(zhuǎn)性致盲眼病的首位。目前為止,濾過性手術(shù)是中晚期患者的主要治療方式,但術(shù)后濾過道過度愈合及瘢痕組織形成所造成的手術(shù)失敗迫使很多患者面臨再次手術(shù)的風險。人結(jié)膜成纖維細胞(HconF)是參與濾過道瘢痕形成的主要細胞,在TGF-β大量存在時可發(fā)生一系列變化,即細胞增殖力增強、轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞,并加速ECM的合成與分泌,從而促進創(chuàng)面修復和瘢痕形成。傳統(tǒng)的抗代謝藥物雖可有效抑制濾過道瘢痕化,但常常引起濾過道漏、角膜內(nèi)皮失代償甚至遲發(fā)性眼內(nèi)炎等嚴重并發(fā)癥。前段時期國內(nèi)絲裂霉素C的停產(chǎn)更是為青光眼濾過術(shù)后抗瘢痕化治療帶來了阻礙(現(xiàn)已恢復生產(chǎn))。因此尋找高效、安全、方便的抗瘢痕化藥物成為提高青光眼濾過手術(shù)成功率的長期目標。溴芬酸鈉(BS)是一種非甾體類抗炎藥,主要用于眼部炎癥的控制。但有研究發(fā)現(xiàn),BS除了用于抗炎治療外,還可通過抑制COX-2介導的信號通路而阻礙TNF-α誘導的人晶狀體上皮細胞的增殖和遷移。因此,此次研究即將BS應用于HconF,評價其在治療青光眼濾過術(shù)后瘢痕化中的作用。方法:利用TGF-β1誘導HconF細胞,構(gòu)建體外的青光眼濾過術(shù)后瘢痕化細胞模型。將BS作用于該瘢痕化細胞模型,利用CCK-8實驗方法檢測細胞增殖,Western Blotting和細胞免疫熒光(IF)實驗檢測細胞表型轉(zhuǎn)化蛋白α-SMA、細胞外基質(zhì)蛋白fibronectin、collagenⅠ和炎性蛋白COX-2的表達變化。結(jié)果:CCK-8結(jié)果顯示,與空白對照組相比,不同濃度的BS(40,100,200,400μg/ml)均明顯抑制HconF細胞增殖(P0.01),且該抑制作用呈濃度依賴性;40μg/mlBS與BS(100,200,400μg/ml)組相比P0.01,而100μg/ml BS與200μg/mlBS、200μg/mlBS與400μg/mlBS之間P0.05,最終選擇100μg/ml為BS的作用濃度。將BS作用于TGF-β1誘導的HconF細胞,TGF-β1+BS組細胞增殖能力明顯小于TGF-β1組(P0.01)。Western Blotting和細胞IF結(jié)果顯示與TGF-β1組相比,TGF-β1+BS組α-SMA蛋白表達明顯下降(P0.01)。同樣地,在BS作用后TGF-β1誘導增加的fibronectin和collagen I蛋白表達水平降低(fibronectin P0.05,collagen I P0.001)。檢測COX-2表達發(fā)現(xiàn)空白對照組與TGF-β1組間未見明顯差別(P0.05);而TGF-β1+BS組相對于TGF-β1組,COX-2蛋白表達明顯增加(P0.01)。結(jié)論:BS可以抑制TGF-β1誘導的HconF細胞纖維化,包括抑制細胞增殖、轉(zhuǎn)化和ECM的生成,該作用可能與COX-2的表達升高有關(guān)。
【圖文】：

第 5 章 實驗結(jié)果第 5 章 實驗結(jié)果conF 細胞增殖的影響濃度的 BS（0，40，100，200，400μg/ml）分別CK-8 檢測細胞增殖變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)（圖 5.1）：與 00，，400μg/ml BS 均明顯抑制 HconF 細胞的增殖（。通過組間比較發(fā)現(xiàn) 40μg/ml BS 與 100μg/ml、200用均存在統(tǒng)計學差異（P<0.01），但 100μg/ml BS S 與 400μg/ml BS 之間無統(tǒng)計學差異（P>0.05），所后續(xù)實驗。

CK-8 法檢測 BS 對 TGF-β1 誘導的 HconF 細胞（＊P<0.05，＊＊P<0.01，＊＊＊P<0.001）GF-β1 誘導的 HconF 細胞表型轉(zhuǎn)化的影rn blotting 方法檢測各組 HconF 細胞的α-SMATGF-β1 組細胞的α-SMA 蛋白表達量明顯高于-β1 組與 TGF-β1+BS 組比較，升高的α-SMA 蛋F 實驗再次驗證了上述結(jié)果（圖 5.4）：即 TGF-照組升高，而再加入 BS 后熒光強度下降。表 MF 轉(zhuǎn)化，而 BS 可以抑制該表型轉(zhuǎn)化。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R775

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本文編號：2614610