【摘要】：目的:探究miR-34AHG-133aa在鼻咽癌中的表達(dá)情況及對鼻咽癌細(xì)胞惡性生物學(xué)功能的影響。方法:1.熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time RT-PCR)、蛋白免疫印跡(Western blot)法測定MIR-34AHG-133aa在鼻咽癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)情況。2.KM生存分析(Kaplan Meier-plotter)評價MIR34AHG-133aa表達(dá)水平與鼻咽癌患者預(yù)后(overall survival,OS)的關(guān)系,通過Real-time RT-PCR探究MIR34AHG-133aa表達(dá)與鼻咽癌患者分期、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。3.慢病毒載體構(gòu)建外源性穩(wěn)定過表達(dá)MIR34AHG-133aa的鼻咽癌細(xì)胞系,通過MTT比色法檢測增殖、細(xì)胞凋亡實驗、劃痕實驗、transwell侵襲和轉(zhuǎn)移實驗、裸鼠成瘤實驗、TUNEL檢測及免疫熒光實驗驗證MIR34AHG-133aa在體內(nèi)外對鼻咽癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果:1.通過對HEK293細(xì)胞進行細(xì)胞全蛋白質(zhì)譜檢測時,我們發(fā)現(xiàn)miR-34a前體宿主RNA(MIR-34AHG)翻譯的一個肽段。隨后,利用抗體驗證的方法證實了該小分子蛋白質(zhì)的存在,并將其命名為MIR-34AHG-133aa。2.通過Western blot發(fā)現(xiàn),MIR-34AHG-133aa在鼻咽癌細(xì)胞CNE1、CNE2、TWO3、C666-1的表達(dá)低于正常鼻咽黏膜細(xì)胞NP69(P0.01)。Real time RT-PCR結(jié)果顯示鼻咽癌組織中MIR-34AHG-133aa的表達(dá)水平明顯低于正常鼻咽黏膜組織(P0.01);鼻咽癌III期患者中MIR-34AHG-133aa表達(dá)明顯高于IV期患者(P0.01);未發(fā)生局部復(fù)發(fā)的鼻咽癌患者MIR-34AHG-133aa表達(dá)水平明顯高于發(fā)生者(P0.01);同樣,未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者MIR-34AHG-133aa表達(dá)明顯高于發(fā)生者(P0.001)。KM生存分析結(jié)果表明,MIR34A-HG-133a低表達(dá)的鼻咽癌患者預(yù)后較差(P0.05)。3.構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)MIR-34AHG-133aa的鼻咽癌細(xì)胞系C666-1,并通過Real time RT-PCR及Western blot對細(xì)胞系進行驗證。而后通過MTT細(xì)胞增殖實驗、細(xì)胞凋亡、遷移與侵襲實驗及裸鼠成瘤實驗評估過表達(dá)MIR-34AHG-133aa基因?qū)Ρ茄拾┘?xì)胞功能的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)過表達(dá)MIR-34AHG-133aa的鼻咽癌細(xì)胞生長速率較對照組細(xì)胞降低(P0.01),且過表達(dá)MIR-34AHG-133aa的鼻咽癌細(xì)胞遷移穿過濾膜的細(xì)胞數(shù)量明顯少于對照組(P0.01,P0.001),再者,過表達(dá)MIR-34AHG-133aa鼻咽癌細(xì)胞的凋亡率為12.1%,高于對照組細(xì)胞的凋亡率0.23%。結(jié)果提示MIR-34AHG-133aa可以明顯抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移,促進鼻咽癌細(xì)胞的凋亡。4.通過對裸鼠移植瘤瘤體進行TUNEL檢測及免疫熒光實驗,結(jié)果顯示接種過表達(dá)MIR-34AHG-133aa的鼻咽癌細(xì)胞的瘤體的凋亡率大于對照組(P0.05),而caspase-3的表達(dá)也明顯高于對照組(P0.001),但ki67的表達(dá)低于對照組(P0.01),結(jié)果提示MIR-34AHG-133aa在體內(nèi)具有抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖且促進鼻咽癌細(xì)胞凋亡的作用。結(jié)論:1.MIR-34AHG-133aa是miR-34a前體宿主RNA(MIR34AHG)翻譯的多肽,在鼻咽癌組織及細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)。2.MIR-34AHG-133aa低表達(dá)的鼻咽癌患者分期較晚,且預(yù)后較差。3.MIR-34AHG-133aa可顯著抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移,促進鼻咽癌細(xì)胞的凋亡。綜上提示,MIR-34A前體宿主非編碼RNA翻譯功能性蛋白(MIR-34AHG-133aa)可能為鼻咽癌的潛在抑制因子。
【圖文】：

eal-time RT-PCR was used to detect the expression of MIR-34AHG-133aa in 8 caryngeal carcinoma and 8 cases of nasopharyngeal inflammatory tissue（P＜0.01）34AHG-133aa 在鼻咽癌細(xì)胞中蛋白水平表達(dá)下調(diào)一步探究 MIR-34AHG-133aa 在鼻咽癌中的表達(dá)情況，我印跡（Western blot, WB）法檢測了 4 株鼻咽癌細(xì)胞株與皮細(xì)胞 NP69 中 MIR-34AHG-133aa 的蛋白表達(dá)水平。實-34AHG-133aa 在鼻咽癌細(xì)胞中蛋白表達(dá)顯著下調(diào)（鼻咽CNE2、TW03、C666-1；正常鼻咽部細(xì)胞：NP69，圖 1-2** P＜0.01）。

MIR-34A 前體宿主非編碼 RNA 翻譯功能性蛋白及對鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響 2019 屆碩士學(xué)位論文2.3 MIR-34AHG-133aa 表達(dá)與鼻咽癌分期及預(yù)后的關(guān)系通 過 Real time RT-PCR 技 術(shù) 對 125 例 鼻 咽 癌 患 者 組 織 樣 本 中MIR-34AHG-133aa 的表達(dá)進行檢測，取表達(dá)中位數(shù)值 0.102 將患者分為高表達(dá)組及低表達(dá)組。通過 KM 生存分析不同 MIR-34AHG-133aa 表達(dá)水平患者的總體生存率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高表達(dá) MIR-34AHG-133aa 的鼻咽癌患者總生存率高于低表達(dá)者，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（*P＜0.05，圖 1-3B）。III 期患者的 MIR-34AHG-133aa 表達(dá)水平明顯高于 IV 期患者（**P＜0.01，圖 1-3A）；無局部復(fù)發(fā)患者中 MIR-34AHG-133aa 表達(dá)明顯高于出現(xiàn)復(fù)發(fā)的患者（**P＜0.01，，圖 1-3C）；同樣，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者 MIR-34AHG-133aa 表達(dá)高于轉(zhuǎn)移者（***P＜0.001，圖 1-3D）。A B
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R739.63

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本文編號：2613357