【摘要】：目的研究藏紅花素通過影響Ca~(2+)內(nèi)流對谷氨酸鹽誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(RGCs)凋亡的影響及可能機制。方法分離大鼠RGCs,以0.1、1mmol/L的谷氨酸鹽刺激RGCs 24、48h,建立RGCs凋亡模型,并用0.1、1.0、3.0μmol/L濃度梯度藏紅花素分別處理。Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)檢測細胞凋亡率,Fluo-3/AM熒光標(biāo)記Ca~(2+)檢測胞內(nèi)鈣離子濃度,Western blot檢測藏紅花素對胞內(nèi)鈣離子介導(dǎo)的凋亡信號分子calpain和CaMKⅡ表達的影響。JC-1熒光染色和Western blot分別檢測藏紅花素對線粒體膜電位和線粒體凋亡相關(guān)信號分子Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2/Bax表達的影響。結(jié)果 0.1mmol/L谷氨酸鹽刺激24h,RGCs細胞凋亡率與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);而當(dāng)刺激48h時,RGCs的凋亡率達到(43.050±2.616)%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。高劑量谷氨酸鹽(1mmol/L)刺激24、48h的RGCs凋亡率為(46.450±1.061)%和(45.500±3.253)%,較對照組均顯著增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。用1mmol/L谷氨酸鹽刺激RGCs 12h后加入0.1、1.0、3.0μmol/L藏紅花素再處理12h,不同濃度藏紅花素均可顯著抑制細胞凋亡(P0.01),且抑制效率具有劑量依賴性。另外,1.0μmol/L藏紅花素組的谷氨酸鹽誘導(dǎo)的胞外Ca~(2+)內(nèi)流減少及鈣依賴蛋白Calpain1和CaMKⅡ的表達減弱,線粒體膜電位增高,Caspase-3和Caspase-9的表達減少,Bcl-2/Bax表達上調(diào)。結(jié)論藏紅花素抑制谷氨酸鹽誘導(dǎo)的RGCs凋亡,其機制可能與阻止胞外Ca~(2+)內(nèi)流,抑制鈣依賴的凋亡信號通路和線粒體凋亡信號通路有關(guān)。
【作者單位】： 陜西省眼科診療中心西安市第四醫(yī)院眼科西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部附屬廣仁醫(yī)院眼科;西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部生理學(xué)與病理生理學(xué)系;第四軍醫(yī)大學(xué)人體解剖與組織胚胎學(xué)教研室暨梁挾琚腦研究中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81273902)~~
【分類號】：R775
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本文編號：2553223