本文選題：CRISPR-Cas　切入點：黑色素瘤細(xì)胞　出處：《中國比較醫(yī)學(xué)雜志》2017年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的利用CRISPR/Cas9系統(tǒng),敲除小鼠黑色素瘤細(xì)胞系的MATP基因,為MATP基因的功能研究奠定基礎(chǔ)。方法利用http://crispr.mit.edu/網(wǎng)站,設(shè)計針對MATP的特異性引物,并將引物鏈接到pCAS9/gRNA1載體。將陽性載體轉(zhuǎn)染小鼠黑色素瘤細(xì)胞系B16F10,利用無限稀釋的方法獲得轉(zhuǎn)染后的單克隆細(xì)胞株。提取不同細(xì)胞株的基因組,通過測序的方法進(jìn)一步篩選出發(fā)生MATP基因切割的細(xì)胞株,并利用Western-blot的方法驗證MATP的表達(dá)情況。結(jié)果成功獲得了3株MATP基因敲除的細(xì)胞株,Western-blot結(jié)果表明,該細(xì)胞株不表達(dá)MATP蛋白。結(jié)論利用pCAS9/gRNA1載體,可以實現(xiàn)B16F10細(xì)胞系MATP基因的敲除。
[Abstract]:Objective to knockout the MATP gene of murine melanoma cell line by CRISPR/Cas9 system, and to lay a foundation for the study of the function of MATP gene. Methods using http://crispr.mit.edu/ website, specific primers for MATP were designed. The primer was linked to the pCAS9/gRNA1 vector. The positive vector was transfected into mouse melanoma cell line B16F10. The transfected monoclonal cell line was obtained by infinite dilution method. The genome of different cell lines was extracted. The MATP gene cleavage cell lines were further screened by sequencing, and the expression of MATP was verified by Western-blot. Results three MATP gene knockout cell lines were successfully obtained by Western-blot. Conclusion the MATP gene knockout of B16F10 cell line can be realized by using pCAS9/gRNA1 vector.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金31272387 全軍實驗動物專項課題SYDW[2014]006
【分類號】：R77

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本文編號：1620141