本文關鍵詞：shRNA定向PPARγ基因預防及治療激素性ONFH實驗研究

  更多相關文章： ONFH BMSCs 激素 shRNA 腺病毒 PPARγ

【摘要】：目的:構建針對過氧化物酶體增殖子活化受體(Peroxisome proliferator acti-vated receptor gamma,PPARγ)致病靶基因的短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA,shRNA),然后通過腺病毒載體導入兔骨髓間充質干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中,觀察shRNA對PPARγ基因的靶向調控功能,及對激素誘導BMSCs成脂和成骨分化的影響,探索對激素性股骨頭缺血性壞死(Osteonecrosis Of The Femoral Head,ONFH)預防及治療作用。方法:1實驗分組:兔BMSCs傳代至第二代,隨機分為6組,接種到6孔培養(yǎng)板中,每孔接種密度為5×104個/ml。(1)正常對照組(N):正常培養(yǎng)細胞,不做任何處理。(2)激素模型組(M):加地塞米松并使其濃度保持10-7 mol/L。(3)腺病毒空載體組(C):同時加入激素與腺病毒,使腺病毒數量是培養(yǎng)細胞數量的20倍,達到充分的轉染。(4)、(5)、(6)干擾1、2、3組(I1、I2、I3):同時加入地塞米松與靶向PPARγ基因的三種shRNA腺病毒。2觀測各組細胞熒光含量,及腺病毒與細胞轉染情況。3細胞轉染后的第5、7、10天,使用實時熒光定量多聚核苷酸鏈式反應(Real-time Quantitative polymerase raction,qPCR)檢測6組實驗細胞內PPARγ基因及骨成型蛋白質(Bone morphogenetic protein,BMP-2)基因的表達量。4細胞轉染后的第9天,使用全自動生化分析儀儀器檢測各實驗組堿性磷酸酶(alternativeliquiditypool,alp)含量,14天檢測甘油三酯(totalglyceride,tg)含量。5細胞轉染后的14天使用油紅o染色,第15天脂肪細胞計數,觀察各組細胞脂肪分化程度。結果:1qpcr結果:m組與e組細胞內的pparγ基因mrna相對n組呈高表達,兩者差異具有統計學意義(p0.05)。i1、i2、i3組細胞內的pparγ基因相對n組呈低表達,兩者差異無統計學意義(p0.05)。與此不同,m組及e組細胞內的bmp-2基因mrna相對n組呈低表達,兩者差異具有統計學意義(p0.05)。i1、i2、i3組細胞內的bmp-2基因與n組表達水平接近,兩者差異無統計學意義(p0.05)。2tg含量顯示,m組及e組中細胞內tg含量相對n組增加,兩者差異有統計學意義(p0.05)。i1、i2、i3組細胞內tg檢測值接近于n組,兩者差異無統計學意義(p0.05),但是低于m組和e組,兩者差異有統計學意義(p0.05)3alp活性含量顯示,m組及e組alp活性含量與n組比較降低,差異有統計學意義(p0.05)。i1、i2、i3組中alp含量與n組含量相近,差異無統計學意義(p0.05)。4脂肪細胞染色與計數:實驗的第15天油紅o染色,計數脂肪細胞。m、e組比n組數量明顯增多,組間差異有統計學意義(p0.05),n組與i1、i2、i3組數量相近,差異無統計學意義(p0.05)。結論：1 shRNA技術能夠靶向調節(jié)PPARγ基因,下調PPARγ基因在BMSCs中表達,抑制激素誘導BMSCs成脂分化。2 shRNA技術為預防及治療激素性ONFH提供新的思路和方法。
【關鍵詞】：ONFH BMSCs 激素 shRNA 腺病毒 PPARγ
【學位授予單位】：川北醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R681.8
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-26
• 結果26-38
• 討論38-42
• 結論42-43
• 參考文獻43-46
• 綜述：股骨頭壞死早期治療方法研究進展46-62
• 參考文獻54-62
• 附錄62-63
• 個人簡歷63
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文63

【相似文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 任黔川;彭芝蘭;譚欣;;PPARγ在卵巢漿液性囊腺癌中的表達[J];重慶醫(yī)學;2009年23期

2 張乾勇;PPAR的結構與功能及其生物學作用[J];國外醫(yī)學(衛(wèi)生學分冊);2000年05期

3 白玉杰,牛丹,趙錦榮,張文紅,呂貫廷,閻小君;Rapid detection of PPAR_γ gene Pro12Ala polymorphism with fluorescence polarization in Chinese population[J];Journal of Medical Colleges of PLA;2003年03期

4 袁平戈;PPARα的主要功能是什么[J];中華肝臟病雜志;2003年05期

5 潘光棟;PPAR-γ及其配體在人體細胞的分子研究[J];職業(yè)衛(wèi)生與病傷;2003年02期

6 曹廷兵,葉治家,彭家和,鞏燕,黃剛;人PPARγ2 cDNA的克隆及其在大腸桿菌中的表達純化[J];第三軍醫(yī)大學學報;2004年01期

7 王剛,陳繼俊,倪沛洲;PPARα受體亞型與新藥研究[J];藥學進展;2004年01期

8 葉平;過氧化體增殖物激活型受體(PPAR)與心血管疾病[J];中華心血管病雜志;2004年07期

9 孫曙光,周智廣;PPARγ與1型糖尿病[J];國外醫(yī)學.內分泌學分冊;2005年02期

10 胡桂芳,武革;PPARγ與2型糖尿病大血管病變的研究進展[J];廣東醫(yī)學院學報;2005年01期

中國重要會議論文全文數據庫 前10條

1 ;Genetic polymorphisms of PPAR-γ,HHEX,PTPRD,KCNQ1,and SRR affect therapeutic efficacy of Pioglitazone in Chinese Patients with type 2 diabetes[A];傳承與發(fā)展，創(chuàng)湖南省生理科學事業(yè)的新高——湖南省生理科學會2011年度學術年會論文摘要匯編[C];2011年

2 ;Dynamic analysis and ligand binding affinity investigation of PPAR mutations[A];華東六省一市生物化學與分子生物學會2003年學術交流會論文摘要集[C];2003年

3 童南偉;;過氧化物酶增殖物激活受體(PPAR)a與脂質代謝[A];全國首屆代謝綜合征的基礎與臨床專題學術會議論文匯編[C];2004年

4 王偉銘;章慧娣;劉峰;陳佳韻;陳楠;;PPARγ活化對腎間質成纖維細胞的作用研究[A];2007年浙滬兩地腎臟病學術年會資料匯編[C];2007年

5 陳剛;林新富;梁繼興;林麗香;沈曉麗;;過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)基因多態(tài)性與老年男性骨質疏松癥相關性研究[A];2008內分泌代謝性疾病系列研討會暨中青年英文論壇論文匯編[C];2008年

6 陳剛;林新富;梁繼興;林麗香;沈曉麗;;過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)基因多態(tài)性與老年男性骨質疏松癥相關性研究[A];2008中國醫(yī)師協會內分泌代謝科醫(yī)師分會年會論文匯編[C];2008年

7 李潔;戴愛國;胡瑞成;朱黎明;王梅芳;;PPARγ影響γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶活性及表達在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用[A];中國生理學會第23屆全國會員代表大會暨生理學學術大會論文摘要文集[C];2010年

8 管又飛;;脂質過氧化物體增殖物激活受體γ(PPAR γ)與糖尿病腎病[A];中華醫(yī)學會腎臟學分會2004年年會暨第二屆全國中青年腎臟病學術會議專題講座匯編[C];2004年

9 孫莉;尚進林;梁浩;程焱;;PPAR全激動劑對小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用[A];第十一屆全國神經病學學術會議論文匯編[C];2008年

10 ;Endothelial PPARγmediates anti-inflammatory actions of rosiglitazone through dissociation of NF-κB[A];中國生理學會心血管生理學術研討會論文集[C];2011年

中國重要報紙全文數據庫 前3條

1 徐錚奎;發(fā)現PPAR拮抗劑[N];醫(yī)藥經濟報;2012年

2 曾凡新邋林敏;PPAR激動劑類抗糖尿病藥研發(fā)喜憂參半[N];中國醫(yī)藥報;2007年

3 袁松范;開發(fā)PPAR多通道激動劑須謹慎[N];中國醫(yī)藥報;2006年

中國博士學位論文全文數據庫 前10條

1 劉炳婷;SUMO特異性蛋白酶1調控脂肪形成的作用及分子機制[D];上海交通大學;2014年

2 陳宏;巨噬細胞PPARγ對皮膚傷口愈合的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

3 韓晶;PPARγ在腦缺血再灌注損傷和過氧化氫損傷中的調控機制研究[D];天津醫(yī)科大學;2014年

4 張巖;PPARα/γ信號通路在高脂性脂肪性肝炎發(fā)病機制中的作用研究[D];蘇州大學;2015年

5 張鷗;阿托伐他汀對動脈粥樣硬化患者外周血中PPAR γ的作用研究及相關炎癥因子與動脈粥樣硬化關系的建模分析[D];鄭州大學;2016年

6 周毅;PPARγ介導的抗氧化機制在血管平滑肌細胞表型轉化中作用和機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2016年

7 滕志朋;PPARβ/δ在大鼠蛛網膜下腔出血后早期腦損傷中的作用及其機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2016年

8 佟強;PPARβ/δ激活在帕金森病中的保護作用及機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2016年

9 王伶;高靜水壓刺激對血小板活化的影響及PPARγ的保護作用的研究[D];南昌大學;2008年

10 孫晶;PPARγ1對系膜細胞外基質生成的抑制作用及其機制[D];復旦大學;2004年

中國碩士學位論文全文數據庫 前10條

1 曹智麗;過氧化物酶增殖物激活受體α（PPARα）在大鼠酒精性肝病發(fā)生過程中的變化[D];河北醫(yī)科大學;2015年

2 宋石;miR-27a通過靶向調控PPARγ對酒精誘導大鼠BMSC分化的影響[D];鄭州大學;2015年

3 鄒佳楠;PPAR-γ在IgA腎病發(fā)生中的作用及其機理研究[D];復旦大學;2014年

4 李春梅;家兔PPARγ和MYF5基因多態(tài)性及其與部分經濟性狀的關聯研究[D];四川農業(yè)大學;2014年

5 李曉鵬;腦膠質瘤中PPARγ、Bcl-2基因表達水平及臨床意義[D];大連醫(yī)科大學;2015年

6 李晉福;慢病毒介導PPAR-γ基因對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖、遷移、侵襲性的影響[D];山西醫(yī)科大學;2016年

7 徐穎;EGFR/MDM2信號通過PPARγ降解途徑促進NFκB激活[D];江蘇大學;2016年

8 高家明;PPARα/Bcl2信號誘導細胞凋亡[D];江蘇大學;2016年

9 冷銀芝;低劑量雙酚A通過PPARγ促進小鼠3T3-L1前脂肪細胞分化的研究[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

10 朱夢;妊娠期糖尿病胎盤PPARγ水平及其對新生兒體脂的影響[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

，

本文編號：930414