發(fā)布時間：2017-06-09 23:05

  本文關鍵詞：基于基因芯片技術篩選創(chuàng)傷性股骨頭壞死特異性表達miRNA的試驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:采用高通量基因芯片檢測技術和real-time PCR技術,篩選并驗證調控創(chuàng)傷性股骨頭壞死發(fā)病的特異性miRNAs,利用生物信息學預測特異性miRNAs所調控的靶mRNA及相關信號通路,為下一步的實驗研究奠定前期研究基礎。方法:回顧性選取2013.1月-2013.12月期間因股骨頸骨折在河南省洛陽正骨醫(yī)院髖部損傷治療中心行手法復位經(jīng)皮空心螺紋釘內(nèi)固定術治療的患者,經(jīng)聯(lián)系后來院參與本次研究,簽署知情同意書。通過篩選期各項檢查,篩選出符合本次研究納入標準的患者10例,分成兩組:術后未發(fā)生股骨頭壞死者5例和術后已發(fā)生股骨頭壞死患者5例,采用高通量芯片技術檢測兩組患者血漿中miRNAs表達譜,篩選出與TIONFH發(fā)病事件相關的特異性表達miRNAs,通過real-time PCR驗證篩選的差異miRNAs,通過生物信息學進行分析預測,獲得特異性表達miRNAs可能調控的靶基因及相關信號通路。結果:兩組患者對比共計篩選出來297個特異性miRNAs,其中表達上調35個和表達下調262個。通過Fold change和P-value篩選出表達最具有差異的2條上調和2條下調miRNAs。經(jīng)qPCR檢測發(fā)現(xiàn),術后壞死組患者血漿中的hsa-mi R-93-5p,hsa-let-7i-5p相比術后未壞死組患者表達增高,而hsa-miR-122-5p,hsa-miR-4711-3p則表達降低,與芯片結果一致。采用TargetScan、mirBase及miRanda三個在線數(shù)據(jù)庫預測2條上調和2條下調miRNAs交集靶基因,上調部分中hsa-miR-93-5p預測到靶基因103個,hsa-let-7i-5p預測到靶基因107個;下調部分中hsa-miR-122-5p預測靶基因個數(shù)為31個,而hsa-miR-4711-3p只在targetsca數(shù)據(jù)庫預測到257個靶基因,其他兩個數(shù)據(jù)庫預測值為0。Go分析結果顯示:上調部分與細胞代謝、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、蛋白修飾及細胞間蛋白修飾密切相關;下調調部分與定位、系統(tǒng)發(fā)育、神經(jīng)發(fā)育及器官發(fā)育密切相關。Pathway分析結果顯示:上調部分與蛋白的結合,酶激活活性,蛋白激酶密切相關;下調部分與蛋白和核酸結合活性和離子通道相關。結論:(1)兩組患者之間存在差異表達mi RNAs,這些miRNAs可能參與調控TIONFH的發(fā)生過程;(2)RT-PCR驗證的差異表達2條上調和2條下調miRNAs,結果與芯片掃描結果一致;(3)這些差異表達miRNAs及其靶mRNA的進一步研究將為TIONFH的早期診斷的潛在標志物研究及下一步TIONFH骨修復過程中mi RNA調控機制研究奠定基礎。
【關鍵詞】：股骨頭壞死 miRNA 靶基因 通路
【學位授予單位】：河南中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R681.8
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表4-7
• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 參考文獻11-13
• 試驗1 臨床資料收集13-16
• 對象與方法13-16
• 1 研究對象13
• 2 試驗方法13
• 3 試驗分組13
• 4 診斷標準13-15
• 4.1 中醫(yī)證候診斷標準13
• 4.2 股骨頭壞死診斷標準13-14
• 4.3 納入標準14
• 4.4 排除標準14
• 4.5 脫落標準及剔除標準14
• 4.6 股骨頭壞死分期標準14-15
• 5 臨床資料收集15-16
• 試驗2 特異性microRNAs篩選、驗證及生物信息學預測16-21
• 材料與方法16-21
• 一、主要儀器16
• 二、主要材料、試劑16
• 三、試驗方法16-21
• 1. 血漿樣本收集16-17
• 2. 血漿總RNA提取與質量檢測17
• 3. RNA瓊脂糖凝膠電泳17-18
• 4. RNA標記與芯片雜交18-19
• 5. Real-timePCR法驗證特異性表達microRNAs19-20
• 6. 統(tǒng)計學處理20-21
• 結果21-26
• 一、臨床資料收集21
• 二、RNA質量檢測結果21-22
• 三、探針分布情況22
• 四、miRNA的差異表達及篩選22-24
• 五、Go分析結果24
• 六、Pathway分析結果24-25
• 七、靶基因預測結果25
• 八、基因定量結果25-26
• 討論26-34
• 1 祖國醫(yī)學對ONFH的認識26-29
• 1.1 病名研究26
• 1.2 病因病機研究26-27
• 1.3 中醫(yī)學關于該病的治療現(xiàn)狀27-29
• 2 現(xiàn)代醫(yī)學對TIONFH的認識29-32
• 2.1 股骨頭的血供與骨折移位程度30
• 2.2 復位的質量30-31
• 2.3 治療時機與術后早期的負重情況31-32
• 2.4 其他因素32
• 3 microRNA與股骨頭壞死32-34
• 結論34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻36-40
• 附錄1 知情同意書40-43
• 文獻綜述43-48
• 參考文獻45-48
• 論文發(fā)表情況48

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本文編號：436863