發(fā)布時間：2023-02-25 16:41

　　目的:通過控制氧氣含量模擬正常髓核細胞的低氧環(huán)境,研究探討低氧環(huán)境能否誘導大鼠髓核細胞發(fā)生自噬,并進一步研究低氧狀態(tài)下髓核細胞中缺氧誘導因子-1α分子的表達量與LC3、Beclin1等自噬標志性分子的表達量是否具有一定的相關性。方法:取體重均一、無椎間盤退化的健康成年SD大鼠,處死后取其尾骨并提取髓核細胞,采用差速貼壁法將提取的髓核細胞純化后予以傳代培養(yǎng),待髓核細胞傳至第三代時,通過顯微鏡觀察其細胞形態(tài),然后將第三代髓核細胞分別予以蘇木精-伊紅染色法和Ⅱ型膠原酶免疫熒光染色法進行染色,觀察細胞形態(tài)及染色結果完成對于髓核細胞的鑒定。通過鑒定確定所提取細胞為大鼠髓核細胞后,取第三代髓核細胞,將其隨機分為A、B、C、D 4個組。將A組置于正常氧含量下(37℃、5%CO₂、20%O₂)培養(yǎng);B組置于低氧狀態(tài)下(37℃、5%CO₂、1%O₂)培養(yǎng);C組細胞首先采用HIF-1α-siRNA轉染,然后置于與B組同樣的低氧條件下培養(yǎng);D組髓核細胞則是將自噬抑制劑3-MA^[1]加入其內(nèi),然后同樣...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
研究材料與方法
    1.實驗動物及主要試劑、儀器
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
    2.大鼠髓核細胞分離培養(yǎng)及鑒定
        2.1 大鼠髓核組織的分離
        2.2 大鼠髓核細胞的提取
        2.3 大鼠髓核細胞的傳代與培養(yǎng)
        2.4 差速貼壁法純化大鼠髓核細胞
        2.5 大鼠髓核細胞的凍存與復蘇
        2.6 大鼠髓核細胞鑒定
    3.實驗分組和方法
        3.1 大鼠髓核細胞的轉染
        3.2 大鼠髓核細胞的實驗分組
        3.3 大鼠髓核細胞總蛋白與RNA的提取
        3.4 Western blot實驗步驟
        3.5 實時熒光定量PCR實驗步驟
    4.實驗的觀測指標
        4.1 Western blot檢測HIF-1α與自噬相關分子蛋白表達
        4.2 實時熒光定量PCR檢測HIF-1α與自噬相關分子m RNA表達
    5.統(tǒng)計學方法
結果
    1.大鼠髓核細胞形態(tài)觀察及鑒定
    2.Western blot檢測HIF-1α與自噬相關分子蛋白表達
    3.q RT-PCR檢測大鼠髓核細胞中HIF-1α與自噬相關基因表達
討論
結論
參考文獻
綜述
    1 腰椎間盤退變性疾病的發(fā)病機制
    2 髓核細胞低氧環(huán)境與缺氧誘導因子
    3 低氧環(huán)境與髓核細胞的凋亡
    4 低氧環(huán)境與髓核細胞的自噬
    5 總結與展望
    參考文獻
作者簡介及讀研期間主要科研成果
致謝



本文編號：3748812