目的:心肌缺血/再灌注損傷是一種常見的復(fù)雜生理病理過程,而Ca2+調(diào)控紊亂是導(dǎo)致缺血再灌注后心肌功能障礙和細胞損傷的重要原因之一。右美托咪定（dexmedetomidine,Dex）作為一種臨床常用的鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛藥,其器官保護作用近年來被越來越多的研究者報道。在心肌缺血再灌注損傷中,已經(jīng)證明Dex可以通過抑制ROS及激活抗炎通路等途徑發(fā)揮保護保用,而它是否可以通過調(diào)節(jié)鈣平衡來減輕缺血再灌注心肌的損傷,目前尚不清楚。本研究旨在探究Dex預(yù)處理對H9C2細胞氧糖剝奪/復(fù)氧（Oxygen Glucose Deprivation/Reperfusion,OGD/R）損傷模型中鈣離子的影響及其相關(guān)分子機制。方法:1、選用H9C2細胞,采用缺氧小室對細胞進行OGD 24 h的處理,隨后復(fù)氧3h,建立OGD/R模型;Dex預(yù)處理組細胞在OGD前經(jīng)不同濃度Dex（0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L）預(yù)處理1 h,其余處理同OGD/R組;對照組細胞常規(guī)培養(yǎng)。2、倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài),應(yīng)用甲基噻唑藍[3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2-... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省211工程院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第一章 引言
第二章 材料與方法
    2.1 實驗對象
    2.2 細胞培養(yǎng)
        2.2.1 實驗試劑
        2.2.2 儀器及耗材
        2.2.3 培養(yǎng)方法
    2.3 氧糖剝奪/復(fù)氧(OGD/R)模型的建立
        2.3.1 實驗試劑
        2.3.2 實驗儀器
        2.3.3 實驗分組
        2.3.4 造模方法
    2.4 光學(xué)顯微鏡下觀察心肌細胞形態(tài)學(xué)的變化
        2.4.1 實驗儀器
        2.4.2 實驗方法
    2.5 甲基噻唑藍比色法（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyltetrazolium bromide，MTT）檢測細胞活力
        2.5.1 實驗試劑
        2.5.2 實驗儀器
        2.5.3 實驗方法
    2.6 2,4-二硝基苯肼顯色法檢測培養(yǎng)液乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase， LDH）釋放率
        2.6.1 實驗試劑
        2.6.2 實驗儀器
        2.6.3 實驗方法
    2.7 鈣成像記錄
        2.7.1 實驗試劑
        2.7.2 實驗儀器
        2.7.3 實驗方法
        2.7.4 實驗試劑(鈣成像第二部分)
        2.7.5 實驗儀器(鈣成像第二部分)
        2.7.6 實驗方法
    2.8 Q-PCR檢測mRNA表達水平
        2.8.1 實驗試劑
        2.8.2 PCR引物
        2.8.3 實驗儀器
        2.8.4 實驗方法
    2.9 Western Blotting檢測蛋白表達水平
        2.9.1 實驗試劑
        2.9.2 實驗儀器
        2.9.3 實驗方法
    2.10 基因沉默
        2.10.1 實驗試劑
        2.10.2 實驗分組
        2.10.3 實驗方法(以6孔板為例)
    2.11 統(tǒng)計方法
第三章 結(jié)果
    3.1 Dex預(yù)處理能減輕H9C2心肌細胞OGD/R損傷并參與細胞內(nèi)的鈣調(diào)控
        3.1.1 細胞活力(MTT法檢測)隨著缺氧/復(fù)氧時間的變化情況
        3.1.2 光學(xué)顯微鏡下細胞形態(tài)學(xué)的變化
        3.1.3 Dex預(yù)處理能顯著提高心肌細胞活力,減少LDH釋放率
        3.1.4 Dex預(yù)處理能明顯抑制細胞內(nèi)鈣超載
    3.2 Dex參與對心肌細胞內(nèi)FKBP12.6及RyR2的表達調(diào)控
        3.2.1 Dex預(yù)處理能上調(diào)FKBP12.6在mRNA及蛋白水平的表達
        3.2.2 Dex預(yù)處理能抑制p-S2814RyR2及凋亡因子Cleaved-Caspase-3的蛋白表達
    3.3 基因沉默F(xiàn)KBP12.6能反轉(zhuǎn)Dex對OGD/R心肌細胞的保護作用
        3.3.1 Real-timePCR法檢測FKBP12.6基因沉默效率,確定轉(zhuǎn)染時間
        3.3.2 基因沉默F(xiàn)KBP12.6,MTT法檢測細胞活力及2,4-二硝基苯肼顯色法檢測培養(yǎng)液LDH釋放率的結(jié)果
        3.3.3 基因沉默F(xiàn)KBP12.6,鈣成像法檢測細胞內(nèi)鈣離子
        3.3.4 基因沉默F(xiàn)KBP12.6,Western blotting檢測RyR2、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3的蛋白表達及RyR2磷酸化的改變
第四章 討論
總結(jié)
參考文獻
Review
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文與會議摘要
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]右美托咪啶預(yù)處理對心肌缺血再灌注損傷的保護作用及鈣循環(huán)調(diào)控蛋白的影響[J]. 李霞,彭碧文,董航.  海南醫(yī)學(xué). 2015(18)
[2]心腦缺血再灌注損傷的機制及防治策略研究進展[J]. 夏強,錢令波.  浙江大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2010(06)
[3]心肌缺血/再灌注損傷機制研究進展[J]. 劉勝中,楊雙強.  實用醫(yī)院臨床雜志. 2007(01)
[4]腸缺血/再灌注損傷后白介素1-β水平與磷脂酶A2激活的關(guān)系[J]. 顏光濤,郝秀華,薛輝,王錄煥,李英麗,石麗萍.  生理學(xué)報. 2002(01)
[5]鋅對缺血再灌注肝臟自由基含量和細胞凋亡的影響[J]. 蔣與剛,郭長江,韋京豫,楊繼軍,蘇俊鋒,王先遠,高蘭興.  中國應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2001(03)
[6]心肌缺血再灌注損傷亞細胞Ca2+反常與ATP酶泵功能抑制[J]. 谷天祥,張顯清,谷春久,石玉秀,李厚文,姜桂娥,趙鳳凱,王天驕.  中華心血管病雜志. 2001(07)
[7]補體耗竭對心肌缺血再灌注的保護作用及機制[J]. 張磊,馬虹,黃守堅,孫家鈞.  中華心血管病雜志. 2001(06)

碩士論文
[1]右美托咪定預(yù)處理對缺血再灌注損傷大鼠心肌線粒體功能的影響[D]. 陸沁源.江蘇大學(xué) 2016
[2]FKBP12.6蛋白缺失對膿毒癥小鼠心肌損害作用的機理研究[D]. 孔令杰.山西醫(yī)科大學(xué) 2012



本文編號：3644727