目的:通過軟骨細胞體外研究及基因敲除小鼠的體內研究探索Ihh在腰椎軟骨終板退變及異常鈣化中的作用及其機制。方法:第一部分Ihh對體外培養(yǎng)軟骨細胞異常鈣化退變的作用及機制研究1.獲取C57小鼠肋軟骨細胞,通過番紅O固綠染色、HE染色及免疫組化檢測Ⅱ型膠原的表達來鑒定軟骨細胞。2.通過RT-PCR分別檢測ihh高表達組、ihh信號通路抑制組和空白對照組中的COLII、COLX、Runx2、OCN、ALP、AGG、ANKH、ENPP1等因子的mRNA表達差異。3.利用流式細胞儀分別檢測抑制ihh和高表達ihh后對軟骨細胞凋亡的影響。第二部分Ihh條件性基因敲除小鼠腰椎軟骨終板異常鈣化退變的分析研究1.利用ihhfUfl/fl;rosa和prxl-cre;ihhfl/-;rosa基因小鼠繁育出ihh-/-基因敲除小鼠并將其作為實驗組,將ihhfl/f1基因小鼠作為對照組,觀察各組基因小鼠大體形態(tài);X線觀察小鼠脊柱椎體高度的變化。2.micro-CT掃描各組基因小鼠的腰1-2椎間盤,觀察結構模型指數(shù)、骨小梁數(shù)目、骨小梁厚度、骨小梁分離度等指標的變化。3.利用RT-PCR分別檢測各組基因小鼠腰椎終... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

軟骨細胞的鑒定

A B C圖 2.2 軟骨細胞的鑒定2.2 細胞形態(tài)變化空白對照組(圖 A)可觀察到軟骨細胞表現(xiàn)為橢圓形或者圓形，ihh 高表達組（圖B）細胞形態(tài)變化不明顯，ihh 信號通路抑制組（圖 C）軟骨細胞則生長緩慢，細胞形態(tài)出現(xiàn)受損，有部分細胞皺縮，并且核固縮現(xiàn)象明顯，出現(xiàn)單個的懸浮細胞。

檢測：Annexin V FITC/PI 雙染結果顯示對照組凋亡率為凋亡率為 8.34±0.22，ihh 信號通路抑制組凋亡率為 14.組凋亡率高于對照組并有統(tǒng)計學意義，ihh 高表達組凋計學意義（P<0.05）空白對照組 ihh 高表達組組 ihh 信號

【參考文獻】：
期刊論文
[1]骨折內固定術與全髖關節(jié)置換術治療老年股骨頸骨折的臨床效果比較[J]. 程鵬,王瑋琪.  中華全科醫(yī)學. 2016(04)
[2]兩種手術方法治療青壯年股骨頸骨折的療效分析[J]. 張華亮,曾劍文,謝建軍,萬平印,付劍平,程良楨.  中國矯形外科雜志. 2014(24)
[3]空心釘鎖定板治療股骨頸骨折術后股骨頭壞死的危險因素分析[J]. 王奉雷.  重慶醫(yī)學. 2014(08)
[4]空心釘取出后發(fā)生股骨頭壞死的多因素分析[J]. 馬建林,張金東,張施龍,張潔.  中華關節(jié)外科雜志(電子版). 2012(06)
[5]空心螺釘內固定治療股骨頸骨折術后股骨頭壞死的影響因素分析[J]. 孫欣,曾榮,胡資兵,郭偉韜,陳思圓,王斌,陳俊虎.  中華創(chuàng)傷骨科雜志. 2012 (06)
[6]間斷拔針對大白兔股骨頸骨折愈合影響的實驗研究[J]. 羅健,陳江濤,田禾,宋興華,王翀,浦玉良.  新疆醫(yī)科大學學報. 2012(01)
[7]股骨頸骨折內固定術后致股骨頭壞死的影響因素分析[J]. 艾自勝,張長青,劉粵,王剛,陳圣寶.  第二軍醫(yī)大學學報. 2008(11)
[8]間斷拔釘對股骨頸骨折愈合的影響[J]. 姚雙權,張英澤,張奉琪,潘進社,吳希瑞,彭阿欽,王鵬程.  中國矯形外科雜志. 2005(12)
[9]成人股骨頭壞死后塌陷的發(fā)病機理早期預測及防治進展[J]. 鄭召民,盧旭華,董天華.  中國矯形外科雜志. 2000(03)



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