目的通過(guò)體外細(xì)胞模型實(shí)驗(yàn),研究抑制Pannexin3是否能夠治療骨性關(guān)節(jié)炎。方法收集因骨性關(guān)節(jié)炎行全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)患者的關(guān)節(jié)軟骨組織,建立細(xì)胞模型。實(shí)驗(yàn)組用siRNA+脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染細(xì)胞,對(duì)照組用NC+脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染細(xì)胞。通過(guò)RT-PCR及Western-blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)MMP-1及MMP-13的mRNA水平及其蛋白表達(dá)情況。最后數(shù)據(jù)用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)處理。結(jié)果軟骨細(xì)胞培養(yǎng)約14天(第一代)及8天(第二代)可長(zhǎng)滿瓶底80%～90%,前2代較少出現(xiàn)分化,可被Ⅱ型膠原蛋白免疫化學(xué)法將其染成棕黃色,在轉(zhuǎn)染24小時(shí)后約80%細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)熒光表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中MMP-1及MMP-13的mRNA含量及蛋白水平明顯低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0. 05)。結(jié)論抑制Pannexin3基因可抑制骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞中MMP-1、MMP-13mRNA及其蛋白表達(dá)。Pannexin3可能是骨性關(guān)節(jié)炎潛在治療靶點(diǎn)。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 研究材料:
    1.2 方法
        1.2.1 軟骨細(xì)胞分離、培養(yǎng)及傳代:
        1.2.2 軟骨細(xì)胞的鑒定:
        1.2.3骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)染:
        1.4.4泛連接蛋白3、基質(zhì)金屬蛋白酶1、13mRNA檢測(cè):
        1.3.5 基質(zhì)金屬蛋白酶1、13蛋白的檢測(cè):
    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:
2 結(jié)果
    2.1 軟骨細(xì)胞的培養(yǎng):
    2.2 軟骨細(xì)胞的鑒定:
    2.3 軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)染:
    2.4 選擇si RNA序列:
    2.5 RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后Panx3、MMP-1、MMP-13m RNA表達(dá)情況:
    2.6 Western-blot對(duì)轉(zhuǎn)染后MMP-1、MMP-13蛋白水平檢測(cè):
3 討論

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