【摘要】：目的:本實驗通過培養(yǎng)原代海馬神經元細胞建立OGD/R模型,作為大腦I/R損傷體外模型,在此基礎之上用右美托咪定標準液加入相應處理組的培養(yǎng)液中,并用線粒體通透性轉換孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)的開放劑蒼術苷對相應對照組進行處理,來觀察模擬缺血再灌注期間大鼠海馬神經元細胞的MPTP的開放情況,線粒體分裂相關蛋白Drp1、Fis1和細胞色素C(Cyt C)、凋亡誘導因子(AIF)的表達。探討線粒體通透性轉運孔在右美托咪定預處理腦缺血再灌注中的作用及機制,為以后臨床治療缺血再灌注疾病的治療提供新的理論依據。方法:本實驗分為兩部分,第一部分為預實驗,預實驗的分組將原代培養(yǎng)出生24h之內的SD大鼠海馬神經元細胞,采用氧糖剝奪法建立缺氧復氧模型,隨機數字表法分成8組(n=6):正常對照組(C組,不對細胞進行處理)、賦形劑組(V組,不進行缺氧復氧,加入體積分數為0.0001的二甲亞砜培養(yǎng)6h)、缺氧復氧組(H/R組,采用氧糖剝奪法缺氧6h,復氧20h,建立大鼠海馬神經元缺氧復氧損傷模型)、H/R+右美托咪定0.1μmol/L組(D1組)、H/R+右美托咪定1.0μmol/L組(D2組)、H/R+右美托咪定5.0μmol/L組(D3組),H/R+右美托咪定10.0μmol/L組(D4組),H/R+右美托咪定100.0μmol/L組(D5組),D1、D2、D3、D4、D5組在缺氧復氧期間分別加入終濃度為0.1、1.0、5.0、10.0、100.0μmol/L的右美托咪定,缺氧6h,復氧20h。用倒置顯微鏡觀察海馬神經元細胞的數量與形態(tài),用細胞增殖與毒性檢測試劑盒檢測各組神經元細胞活性,第二部分為正式實驗:分組為原代培養(yǎng)出生24h之內的SD大鼠海馬神經元細胞,采用氧糖剝奪法建立缺氧復氧模型,隨機數字表法分成6組(n=6):正常對照組(C組,不對細胞進行處理)、賦形劑組(V組,不進行缺氧復氧,加入體積分數為0.0001的二甲亞砜培養(yǎng)6h)、缺氧復氧組(H/R組,采用氧糖剝奪法缺氧6h,復氧20h,建立大鼠海馬神經元缺氧復氧損傷模型)、H/R+右美托咪定1.0μmol/L組(D組)、H/R+蒼術苷(A組)、右美托咪定+蒼術苷組(D/A組)。用倒置顯微鏡觀察海馬神經元細胞的數量與形態(tài),用細胞增殖與毒性檢測試劑盒檢測各組神經元細胞活性,用細胞內鈣離子檢測試劑盒測細胞質中的鈣離子濃度,用自分光分度儀檢測海馬MPTP開放情況,用Western blot檢測線粒體分裂相關蛋白Drp1、Fis1和細胞色素C(Cyt C)、凋亡誘導因子(AIF)的表達。結果:在預實驗中,與H/R組比較,D4、D5組神經元細胞生長明顯受抑制,在后續(xù)實驗中舍去,D2組較D1、D3組神經元細胞數量和活性明顯增高(P0.05)。在正式實驗中,與C組比較,V組各指標差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),H/R組神經元細胞數量和活性明顯降低;且鈣離子濃度和Drp1、Fis1、Cyt C、AIF蛋白的表達顯著增高(P0.05),MPTP吸光值減少程度增大,MPTP開放程度增加,(P0.05);與(H/R)組比,D組、(D/A)組MPTP吸光值減少程度降低,MPTP開放程度減小,(P0.05);且鈣離子濃度和Drp1、Fis1、Cyt C、AIF蛋白的表達顯著降低(P0.05)。結論:右美托咪定(0.1-5.0μmol/L)可以明顯減輕大鼠海馬神經元細胞缺氧復氧損傷中細胞的凋亡,其中1μmol/L是右美托咪定最佳的腦保護濃度;右美托咪定減輕缺氧復氧對大鼠海馬神經元細胞的損傷,可能通過抑制海馬神經元細胞MPTP的開放發(fā)揮作用。
【圖文】：

各組神經元生長狀態(tài)（×400）

圖 2A. 線粒體分裂蛋白的表達 圖 2B. 細胞凋亡蛋白的表達表 5. 各組大鼠海馬神經元線粒體分裂相關蛋白及凋亡相關蛋白的表達比較（n=6, x±s）組別 Drp1 Fis1 CytC AIF
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R614

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 姜翠翠;夏滿莉;王敏;陳士票;;右美托咪定預處理減輕離體大鼠心臟缺血/再灌注損傷的線粒體相關機制[J];浙江大學學報(醫(yī)學版);2013年03期

相關博士學位論文 前1條

1 林生;右美托咪定對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用及機制[D];山東大學;2013年

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本文編號：2647016