【摘要】：目的探討阻斷Kupffer細(xì)胞(Kupffer cells,KCs)T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白4(T-cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule 4,TIM-4)誘導(dǎo)小鼠原位肝移植術(shù)后i Treg細(xì)胞的產(chǎn)生及其相關(guān)機(jī)制。方法建立小鼠原位肝移植急性排斥反應(yīng)模型,分為sham組、control m Ab組、TIM-4 m Ab組。流式細(xì)胞儀檢測KCs活化,Western blot檢測肝臟TIM-4表達(dá),TUNEL檢測肝細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptotic index,AI)。提取KCs,激光共聚焦檢測KCs TIM-4表達(dá),將KCs和提取的初始CD4+T細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng),激光共聚焦檢測Kupffer細(xì)胞TIM-4表達(dá),分為control組、control m Ab組以及TIM-4 m Ab組;CFSE檢測CD4+T細(xì)胞增殖,流式細(xì)胞儀檢測CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞,ELISA檢測IL-4、IL-6、IL-13水平,Western blot檢測STAT6表達(dá)。建立小鼠移植模型,分為3組:i Treg組移植模型注入i Treg細(xì)胞(預(yù)先用TIM-4 m Ab處理的TIM-4+KCs與初始CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)所誘導(dǎo)),sham組和單純肝移植組(LT)注入相應(yīng)的PBS作為對照,檢測各組AST、ALT、TBIL水平,HE染色評價(jià)肝組織排斥活動(dòng)指數(shù)(rejective activity index,RAI),觀察小鼠生存率。結(jié)果肝移植術(shù)后24、48、72 h KCs的活化分別為15.9%、21.6%、28.3%,術(shù)后1、3、7 d TIM-4蛋白表達(dá)水平明顯高于sham組(P0.05);control m Ab組AI值(29.23±2.56)明顯高于sham組和TIM-4 m Ab組[(0.40±0.49),(11.04±2.28),P0.05]。KCs與CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)后,control、control m Ab以及TIM-4 m Ab組CD4+T細(xì)胞的增殖率分別為32.5%、31.6%、17.2%,CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞分化分別為12.4%、13.9%、28.1%,共培養(yǎng)上清液TIM-4 m Ab組IL-4、IL-6、IL-13分泌水平明顯低于control m Ab(P0.05),且加入TIM-4 m Ab明顯降低了與TIM-4+KCs共培養(yǎng)的CD4+T細(xì)胞p-STAT6蛋白表達(dá)(P0.05),外源性加入IL-4可明顯增高CD4+T細(xì)胞p-STAT6蛋白的表達(dá)(P0.05)。移植模型注入i Treg細(xì)胞,i Tregz組肝功指標(biāo)明顯好轉(zhuǎn),與LT組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。肝組織病理學(xué)檢查,i Treg組RAI平均得分為(3.97±0.67),明顯低于LT組[(8.47±0.90),P0.05],且i Treg組小鼠平均存活時(shí)間延長。結(jié)論阻斷KCs TIM-4能夠抑制初始CD4+T細(xì)胞IL-4/STAT6信號通路的激活,從而誘導(dǎo)更多i Treg細(xì)胞的生成,致使宿主對移植物產(chǎn)生免疫耐受。
【圖文】：

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本文編號：2551104