發(fā)布時間：2018-06-26 17:58

  本文選題：神經(jīng)干細胞 + 細胞因子　； 參考：《安徽醫(yī)科大學》2017年博士論文

【摘要】：中樞神經(jīng)損傷后神經(jīng)元無法再生,損傷平面以下運動,感覺及括約肌功能喪失�，F(xiàn)有的治療措施只能延緩脊髓損傷,無法逆轉(zhuǎn)已損傷的神經(jīng)組織。神經(jīng)干細胞的發(fā)現(xiàn)為其治療提供了一個全新的方向。神經(jīng)干細胞具有增殖、自我更新和分化成神經(jīng)細胞的能力,從而替代死亡的神經(jīng)元,重建神經(jīng)通路。但目前單純神經(jīng)干細胞移植由于缺乏細胞外基質(zhì)的支持,其存活率和分化特性嚴重受到影響。而神經(jīng)組織工程技術(shù)治療脊髓損傷是現(xiàn)在研究的一個熱點,本課題組擬通過神經(jīng)球方法原代培養(yǎng)大鼠胚胎神經(jīng)干細胞,并研究神經(jīng)干細胞體外分化特性,利用培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞作為種子細胞和膠原凝膠生物支架一起構(gòu)建神經(jīng)干細胞三維培養(yǎng)模型,并檢測膠原凝膠生物支架與神經(jīng)干細胞的生物相容性,最后構(gòu)建控釋細胞因子的膠原凝膠生物支架,并觀察其對神經(jīng)干細胞的生物學影響。本研究共分為三個部分:在第一部分中,我們利用無血清懸浮培養(yǎng)的方法分離培養(yǎng)大鼠胚胎皮質(zhì)來源的神經(jīng)干細胞,用免疫熒光的方法檢測神經(jīng)干細胞及其分化細胞的標志物。結(jié)果顯示體外無血清培養(yǎng)胎鼠皮質(zhì)神經(jīng)干細胞,可得到懸浮生長的神經(jīng)球,但懸浮生長的神經(jīng)球可以發(fā)生融合,免疫細胞化學顯示神經(jīng)球表達神經(jīng)干細胞標志物巢蛋白,經(jīng)過胎牛血清誘導后,神經(jīng)干細胞可以分化為神經(jīng)元,神經(jīng)膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞,其中神經(jīng)膠質(zhì)細胞的分化比例最高。在第二部分中我們將神經(jīng)干細胞與膠原凝膠進行三維培養(yǎng)構(gòu)建神經(jīng)干細胞三維培養(yǎng)模型,結(jié)果顯示神經(jīng)干細胞與膠原凝膠具有良好的生物相容性,膠原凝膠三維支架中的神經(jīng)干細胞可以快速增殖并形成神經(jīng)克隆球,這些神經(jīng)克隆球可以被傳代并且重新在懸浮培養(yǎng)體系中形成傳統(tǒng)的神經(jīng)球。膠原凝膠中的神經(jīng)克隆球表達神經(jīng)干細胞的特異性標志物巢蛋白,并且可以分化形成神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞。與懸浮培養(yǎng)的神經(jīng)球相比,早期三維培養(yǎng)中形成的神經(jīng)克隆球其分化為神經(jīng)元的潛能更高,且三維培養(yǎng)中神經(jīng)球突起長度明顯長于貼壁分化組中神經(jīng)球的長度。在第三部分中我們首先構(gòu)建控釋細胞因子的膠原凝膠支架,利用ELISA方法檢測生物支架中細胞因子的釋放曲線,結(jié)果顯示膠原凝膠是良好的細胞因子控釋載體支架,細胞因子在體外釋放可達10天,控釋細胞因子的膠原凝膠支架與神經(jīng)干細胞共培養(yǎng)后,并分為共分為四組:A:復合BDNF-NT-3膠原凝膠組(實驗組);B:復合BDNF膠原凝膠組(對照組);C:復合NT-3膠原凝膠組(實驗組)D:膠原凝膠組(對照組)。利用CCK-8檢測各培養(yǎng)組中的細胞活性,結(jié)果顯示復合BDNF-NT-3膠原凝膠組中細胞活力要高于其他實驗組,其中膠原凝膠組的細胞活力最低。隨機選取各組20個神經(jīng)球,同時利用DP71圖像處理軟件計算各組神經(jīng)軸突的長度,結(jié)果顯示復合BDNF-NT-3膠原凝膠組中神經(jīng)突起的長度要長于其他各組。各組神經(jīng)干細胞培養(yǎng)一周后,用1%的FBS誘導分化,結(jié)果顯示各組神經(jīng)干細胞均可分化為神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞,復合BDNF-NT-3膠原凝膠組分化的神經(jīng)元比例最高,其中在復合BDNF-NT-3膠原凝膠組和復合BDNF膠原凝膠組中神經(jīng)干細胞分化比例的順序為神經(jīng)元神經(jīng)膠質(zhì)細胞少突膠質(zhì)細胞,在復合NT-3膠原凝膠組和膠原凝膠組中神經(jīng)干細胞分化比例的順序為神經(jīng)膠質(zhì)細胞神經(jīng)元少突膠質(zhì)細胞。綜上所述,在無血清含有生長因子的培養(yǎng)條件下,利用神經(jīng)球方法可以分離培養(yǎng)出胎鼠皮質(zhì)神經(jīng)干細胞,神經(jīng)干細胞具有增殖和多向分化的能力。膠原凝膠與神經(jīng)干細胞具有良好的生物相容性,可以提供神經(jīng)干細胞生長所需要的三維環(huán)境,作為細胞因子控釋的載體,不僅可以保護細胞因子的生物活性,還可以促進神經(jīng)干細胞軸突生長和向神經(jīng)元方向分化,多個細胞因子聯(lián)合應用,其作用更為有效。
[Abstract]:In the second part , neural stem cells can be differentiated into neurons , glial cells and microglial cells . The neural stem cells can be differentiated into neurons , glial cells and microglial cells . The results showed that the neural stem cells could be differentiated into neurons , glial cells and microglial cells in the composite NT - 3 collagen gel group and the composite BDNF - NT - 3 collagen gel group .
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R651.2

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本文編號：2070908