本文選題：人參皂苷Rb1 + 骨關(guān)節(jié)炎��； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：第一部分細(xì)胞實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一IL-1p對(duì)軟骨肉瘤細(xì)胞SW1353Ⅱ型膠原代謝的影響及人參皂苷Rbl對(duì)Ⅱ型膠原的保護(hù)作用目的：觀察IL-1p及Rbl對(duì)軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原代謝的影響及人參皂苷Rb1 (GRb1)對(duì)軟骨細(xì)胞的保護(hù)作用。篩選最佳GRb1藥物濃度。方法：研究對(duì)象為SW1353細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組、IL-1β組、人參皂苷Rb1低、中、高劑量組(20、40、80μM)。(1)用IL-1p干預(yù)SW1353細(xì)胞,應(yīng)用Western Blot (WB)方法檢測(cè)空白對(duì)照組及IL-1p組CⅡ、MMP-13的表達(dá)。(2)設(shè)定3個(gè)GRb1藥物濃度(20、40、80μM),應(yīng)用Western Blot、ELISA、消化法等方法,檢測(cè)不同濃度GRb1對(duì)IL-1p誘導(dǎo)后的SW1353細(xì)胞CⅡ、MMP-13、PⅡNP、 Hyp、CTX-II表達(dá)的影響,以篩選最佳藥物濃度。結(jié)果：與空白對(duì)照組比較,IL-1β組CⅡ表達(dá)水平明顯降低,MMP-13表達(dá)水平明顯升高。GRb1能顯著下調(diào)IL-1β刺激后的MMP-13、CTX-Ⅱ的高表達(dá),上調(diào)IL-1β刺激后CⅡ、PIINP及Hyp低表達(dá),且成劑量依賴(lài)性。結(jié)論：GRbl對(duì)IL-1β誘導(dǎo)后的SW1353細(xì)胞Ⅱ型膠原代謝有保護(hù)作用。濃度為80μM的GRb1可作為細(xì)胞干預(yù)的最佳濃度。實(shí)驗(yàn)二人參皂苷Rb1對(duì)IL-1β誘導(dǎo)后的Notch通路的影響目的：觀察人參皂苷Rb1對(duì)IL-1β誘導(dǎo)后的Notch信號(hào)通路關(guān)鍵因子表達(dá)的影響。方法：以最佳GRb1濃度干預(yù)IL-1β處理后的SW1353細(xì)胞,應(yīng)用WB方法檢測(cè)Notch信號(hào)通路關(guān)鍵因子Notchl及JAG1的表達(dá)；應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(q-PCR)方法檢測(cè)Notch信號(hào)通路關(guān)鍵因子Notchl及JAG1 mRNA的表達(dá)。結(jié)果：與IL-1β組相比,GRb1能顯著下調(diào)IL-1β誘導(dǎo)的Notch1及JAG1的高表達(dá)。結(jié)論：GRb1能下調(diào)Notch1及JAG1的水平,調(diào)控Notch信號(hào)通路。實(shí)驗(yàn)三人參皂苷Rb1調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶-13防治骨關(guān)節(jié)炎的機(jī)制研究目的：通過(guò)觀察人參皂苷Rb1以及Notch信號(hào)通路特異性抑制劑DAPT對(duì)IL-1β誘導(dǎo)后的MMP-13、Notch1、JAG1蛋白和mRNA表達(dá)的影響,探討人參皂苷Rb1通過(guò)Notch信號(hào)通路調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶-13防治骨關(guān)節(jié)炎的機(jī)制。方法：以最佳GRb1濃度及Notch信號(hào)通路特異性抑制劑DAPT干預(yù)IL-1p處理后的SW1353細(xì)胞,采用q-PCR法檢測(cè)MMP-13.Notch1及JAG1 mRNA表達(dá),采用WB方法檢測(cè)CⅡ、MMP-13、Notch1及JAG1的表達(dá)。結(jié)果：與IL-1β組相比,GRb1組CⅡ表達(dá)水平明顯上調(diào)；MMP-13. Notch1及JAG1表達(dá)水平明顯下降。與DAPT組相比,GRb1組CⅡ、 Notchl及JAG1表達(dá)水平較高,MMP-13表達(dá)水平較低。結(jié)論：GRb1能抑制IL-1p誘導(dǎo)的SW1353細(xì)胞CⅡ的低表達(dá)及MMP-13、Notch1、JAG1的高表達(dá)。GRb1對(duì)OA病程中活化的Notch信號(hào)通路有一定程度的抑制作用。GRb1對(duì)骨關(guān)節(jié)炎的保護(hù)作用可能與GRb1通過(guò)調(diào)控Notch信號(hào)通路抑制MMP-13的表達(dá)相關(guān)。第二部分動(dòng)物實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)四人參皂苷Rbl對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎模型大鼠的軟骨保護(hù)作用及機(jī)制研究目的：研究人參皂苷Rbl對(duì)大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎模型的軟骨組織中CⅡ、MMP-13、Notch1及JAG1表達(dá)的影響,探討人參皂苷Rbl對(duì)關(guān)節(jié)軟骨的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法：成年SD雄性大鼠40只,隨機(jī)選取10只作為正常對(duì)照組,其余采用國(guó)際公認(rèn)的Hulth法建立大鼠右膝骨關(guān)節(jié)炎(KOA)動(dòng)物模型,并隨機(jī)分為模型對(duì)照組、GRbl組、DAPT組,每組各10只。造模后4周,模型對(duì)照組予以生理鹽水(0.3 mL,0.9%)膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射,其余兩組分別予以GRb1 (0.3 mL,80 μM), DAPT (0.3 mL,10 μM)右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射,1次/周,共6周。免疫組織化學(xué)法及Western blot方法檢測(cè)各組軟骨組織中CⅡ、MMP-13、Notch1及JAG1的表達(dá)。ELISA法、消化法檢測(cè)大鼠血清中PIINP、Hyp以及CTX-Ⅱ的表達(dá)。結(jié)果：(1)HE染色結(jié)果顯示：正常組關(guān)節(jié)軟骨表面光滑,各層細(xì)胞形狀及排列整齊,潮線(xiàn)清晰。與正常組相比,模型組關(guān)節(jié)軟骨Mankin's評(píng)分升高,HE染色軟骨層次破壞,軟骨層變薄,軟骨表層毛糙甚則潰瘍形成。與模型組相比,其余各處理組軟骨組織Mankin's評(píng)分不同程度降低,軟骨結(jié)構(gòu)紊亂有明顯改善。(2)與正常組相比,模型組血清中PⅡNP、Hyp表達(dá)降低,CTX-II表達(dá)明顯升高。與模型組相比,DAPT組及GRb1組血清中PIINP、Hyp表達(dá)明顯升高,CTX-Ⅱ表達(dá)降低。與DAPT組相比,GRb1組血清中PIINP、Hyp表達(dá)升高,CTX-Ⅱ表達(dá)降低。(3)免疫組化法檢測(cè)結(jié)果顯示：正常關(guān)節(jié)軟骨組織中,CⅡ陽(yáng)性表達(dá)較多,MMP-13、Notch1及JAG1陽(yáng)性表達(dá)較少。與正常組相比,模型組CⅡ陽(yáng)性表達(dá)明顯減少,而MMP-13、Notch1及JAG1陽(yáng)性表達(dá)明顯增加。與模型組相比,GRb1及DAPT組CⅡ陽(yáng)性表達(dá)較多,MMP-13、Notch1及JAG1陽(yáng)性表達(dá)較少。與DAPT組相比,GRb1組CⅡ、Notch1及JAG1陽(yáng)性表達(dá)較多,MMP-13陽(yáng)性表達(dá)較少。(4)WB檢測(cè)結(jié)果顯示：與正常組相比,GRb1組CⅡ表達(dá)較少,MMP-13、Notch1及JAG1表達(dá)增加；與模型組相比,GRb1組CⅡ表達(dá)明顯增加,MMP-13、Notchl及JAG1表達(dá)顯著減少；與DAPT組相比,GRb1組CII、Notchl及JAG1表達(dá)增加,MMP-13表達(dá)減少。結(jié)論：GRb1對(duì)大鼠膝OA模型的軟骨組織Mankin's評(píng)分及結(jié)構(gòu)損傷有明顯的改善。GRb1能上調(diào)大鼠膝OA軟骨組織中CⅡ的低表達(dá),下調(diào)MMP-13、Notch1、JAG1的高表達(dá)。
[Abstract]:The effects of IL - 1p and Rbl on type 鈪，

本文編號(hào)：1874036