目的:探究基于3D打印技術(shù)制備復(fù)合甲基丙烯酸酯明膠(gel),海藻酸鈉(alg)和透明質(zhì)酸(Ha)水凝膠材料支架的可能性。篩選并制備具有一定力學(xué)性能和辨析度高的支架。研究其體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化的能力。方法:第一部分,基于3D打印技術(shù)制備水凝膠支架。先將海藻酸鈉和透明質(zhì)酸使用聚乙二醇二縮水甘油醚(PEGDG)作為交聯(lián)劑進(jìn)行物理交聯(lián),再以不同的比例與gel混合得到gel/alg-Ha復(fù)合水凝膠,最后使用3D打印技術(shù)制備支架。測(cè)量拉伸強(qiáng)度和抗壓強(qiáng)度,驗(yàn)證支架的力學(xué)性能;測(cè)定溶脹率和吸水率,驗(yàn)證支架的吸水性能;測(cè)定體外降解率,驗(yàn)證支架的降解性能。第二部分,驗(yàn)證支架體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化的研究。根據(jù)含4%、6%、8%(g/ml)的alg-Ha不同濃度設(shè)置gel+(alg+Ha)4,gel+(alg+Ha)6,gel+(alg+Ha)8組作為實(shí)驗(yàn)組,以單純的gel組,gel+alg組和alg+Ha組為對(duì)照組,提取兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)體外擴(kuò)增培養(yǎng)后,接種到各個(gè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組上。培養(yǎng)7天后,用掃描電子顯微鏡(SEM)觀察細(xì)胞和支架的粘附形態(tài),使用鈣黃綠素/碘化丙啶染色檢測(cè)支架...

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
引言
第一部分 基于3D打印技術(shù)制備甲基丙烯酸酯明膠/海藻酸鈉/透明質(zhì)酸水凝膠支架
    前言
    1 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 甲基丙烯酸酯明膠的合成
        2.2 制備物理交聯(lián)后的海藻酸鈉和透明質(zhì)酸水凝膠支架。
        2.3 3D打印復(fù)合gelMA/alg/HA水凝膠支架
            2.3.1 預(yù)制打印支架的生物墨水
            2.3.2 支架的制備
        2.4 3D打印支架的測(cè)試與表征
            2.4.1 不同支架的外貌觀察
            2.4.2 不同支架的溶脹率和吸水率檢測(cè)
            2.4.3 不同支架的力學(xué)性能檢測(cè)
            2.4.4 不同支架的體外降解性能檢測(cè)
        2.5 統(tǒng)計(jì)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 甲基丙烯酸酯明膠的合成
        3.2 各組支架的外貌表觀圖
        3.3 各組支架的溶脹率和吸水率的檢測(cè)結(jié)果
        3.4 各組支架的抗壓強(qiáng)度和拉伸強(qiáng)度的檢測(cè)結(jié)果
        3.5 各組支架的體外降解實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果
    4 討論和階段小結(jié)
第二部分 復(fù)合甲基丙烯酸酯明膠/海藻酸鈉/透明質(zhì)酸水凝膠支架體外誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化研究
    前言
    1 實(shí)驗(yàn)的儀器和材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)主要儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2 實(shí)驗(yàn)的方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
        2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        2.3 兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)提取與培養(yǎng)
        2.4 各組支架用于兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
        2.5 支架上的細(xì)胞DNA檢測(cè)
        2.6 支架上的糖胺聚糖GAG含量檢測(cè)
        2.7 鈣黃綠素/PI熒光染色用于活死細(xì)胞的檢測(cè)
        2.8 掃描電鏡(SEM)觀察
        2.9 蘇木精-伊紅(HE)染色
        2.10 二型膠原的免疫組化染色
        2.11 Qrt-PCR檢測(cè)軟骨相關(guān)特征性基因的表達(dá)情況
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 各組支架上的細(xì)胞DNA的增殖情況
        4.2 各組支架上的鈣黃綠素/PI熒光活死細(xì)胞染色情況
        4.3 掃描電子顯微鏡(SEM)檢測(cè)結(jié)果
        4.4 糖胺聚糖(GAG)的分泌量的檢測(cè)結(jié)果
        4.5 蘇木素-伊紅(HE)染色的檢測(cè)結(jié)果
        4.6 二型膠原的免疫組化染色的檢測(cè)結(jié)果
        4.7 熒光定量PCR檢測(cè)軟骨相關(guān)基因表達(dá)情況的檢測(cè)結(jié)果
    5 階段討論
    6 全文討論與總結(jié)
        6.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與關(guān)節(jié)軟骨的關(guān)系
        6.2 骨性關(guān)節(jié)炎和軟骨缺損的認(rèn)識(shí)
        6.3 軟骨組織工程技術(shù)在軟骨損傷修復(fù)中的應(yīng)用
        6.4 3D打印技術(shù)在軟骨組織工程的應(yīng)用
        6.5 總結(jié)與展望
            6.5.1 全文總結(jié)與創(chuàng)新
            6.5.2 研究的展望
參考文獻(xiàn)
縮寫(xiě)詞表
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3754936