發(fā)布時間：2017-05-11 06:07

  本文關(guān)鍵詞：纖維蛋白凝膠包埋下多孔支架上人真皮成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景： 組織工程支架給予細(xì)胞提供力學(xué)支撐、生長空間、化學(xué)及生物學(xué)刺激，引導(dǎo)細(xì)胞沿特定器官組織內(nèi)部構(gòu)型生長，以便合成具有特定功能的器官組織，因此支架的設(shè)計至關(guān)重要。本實驗主要研究體內(nèi)共培養(yǎng)及體外共培養(yǎng)下細(xì)胞在不同孔徑支架上的形態(tài)學(xué)特性及體內(nèi)培養(yǎng)情況支架孔徑的不同對細(xì)胞長入支架的影響。 第一部分纖維蛋白凝膠的包埋對不同孔徑支架上人真皮成纖維細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響 目的研究模擬體內(nèi)共培養(yǎng)與體外共培養(yǎng)對不同孔徑支架上細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。 方法實驗組：在自制正面觀模型F及側(cè)面觀模型L中，將分離純化的人真皮成纖維細(xì)胞分別和5種不同孔徑（600、400、270、170、100um）的鎳網(wǎng)共培養(yǎng)，并用纖維蛋白凝膠將其包埋來模擬細(xì)胞支架體內(nèi)共培養(yǎng)。對照組：方法和實驗組相同，但無纖維蛋白凝膠的包埋。倒置相差顯微鏡被用來觀察人真皮成纖維細(xì)胞在鎳網(wǎng)的生長方式。用鬼筆環(huán)肽將兩組中細(xì)胞染色，并用共聚焦熒光顯微鏡觀察兩組中人真皮成纖維細(xì)胞中微絲骨架的排列。 結(jié)果在實驗組，無論鎳網(wǎng)孔徑的大小，人真皮成纖維細(xì)胞的主要生長方式為沿邊疊層生長，即細(xì)胞首先沿著網(wǎng)孔生長，然后隨著細(xì)胞的增殖，開始疊層排列，并繼續(xù)按鎳網(wǎng)構(gòu)架生長；同時有部分細(xì)胞脫離支架長入周圍的纖維蛋白凝膠中。在對照組，隨著支架的孔徑的變小，細(xì)胞的主要生長方式由沿邊疊層生長逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榧軜蛏L，即細(xì)胞整個懸空，只有兩端和支架相連；同時并無細(xì)胞脫離支架生長。 結(jié)論體外培養(yǎng)情況下，隨著支架孔徑的變小，細(xì)胞的生長形態(tài)為沿支架構(gòu)型生長向跨橋生長轉(zhuǎn)變。模擬體內(nèi)培養(yǎng)情況下，細(xì)胞的生長形態(tài)并不隨支架孔徑的變化而變化，而主要沿支架構(gòu)型生長。 第二部分纖維蛋白凝膠包埋下的孔徑的不同對成纖維細(xì)胞長入多孔立體支架的影響 目的通過纖維蛋白凝膠對支架的包埋來研究模擬體內(nèi)培養(yǎng)下不同孔徑多孔立體支架對成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。 方法應(yīng)用鎳網(wǎng)及聚二甲基硅氧烷(PDMS)制作不同孔徑的多孔立體支架；純化培養(yǎng)成纖維細(xì)胞并種植于支架的周圍，并用纖維蛋白凝膠包埋，根據(jù)鎳網(wǎng)孔徑設(shè)置實驗組及空白對照組。給予細(xì)胞DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole)染色及鬼筆環(huán)肽染色,并用倒置相差顯微鏡及共聚焦顯微鏡下觀察，記錄細(xì)胞遷延長度并繪制細(xì)胞遷延曲線，記錄細(xì)胞穿網(wǎng)后細(xì)胞數(shù)目并對比。 結(jié)果形態(tài)學(xué)觀察：大部分成纖維細(xì)胞以觸足的形式和支架接觸，然后細(xì)胞及其內(nèi)部的微絲骨架按照支架的構(gòu)型生長排列，當(dāng)細(xì)胞的增殖到一定的程度后開始出現(xiàn)大量穿孔現(xiàn)象；少部分的成纖維細(xì)胞可直接穿過支架上的孔隙。DAPI染色示：各組細(xì)胞核形態(tài)正常，核質(zhì)均染，未見明顯凋亡及壞死細(xì)胞。細(xì)胞遷延曲線示：實驗組中細(xì)胞遷延速度大于對照組，不同孔徑多孔立體支架內(nèi)細(xì)胞遷延速度相差不大；當(dāng)細(xì)胞遇到鎳網(wǎng)后細(xì)胞遷延會出現(xiàn)阻滯，呈現(xiàn)為平臺期。不同孔徑支架細(xì)胞穿網(wǎng)數(shù)目比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論模擬體內(nèi)培養(yǎng)的情況下，細(xì)胞會首先依附到支架上生長，而不是直接穿孔長入支架，當(dāng)細(xì)胞的數(shù)目增殖到一定程度時便會脫離支架，出現(xiàn)穿孔現(xiàn)象。細(xì)胞在三維多孔支架上內(nèi)穿行的速度和支架孔徑的大小無關(guān)，而和細(xì)胞在支架上遷延的速度及細(xì)胞增殖的速度相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：組織工程 支架 纖維蛋白凝膠 成纖維細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-14
• 參考文獻12-14
• 第一部分 纖維蛋白凝膠的包埋對不同孔徑支架上人真皮成纖維細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響14-23
• 1.材料14-15
• 2.方法15-17
• 5 結(jié)果17-19
• 6.討論19-21
• 參考文獻21-23
• 第二部分 纖維蛋白凝膠包埋下的孔徑的不同對成纖維細(xì)胞長入多孔立體支架的影響23-32
• 1 材料23
• 2.方法23-25
• 3.結(jié)果25-28
• 4.討論28-31
• 參考文獻31-32
• 結(jié)論32-33
• 綜述33-47
• 參考消息40-47
• 攻讀碩士學(xué)位期間研究成果47-48
• 致謝48-49

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：纖維蛋白凝膠包埋下多孔支架上人真皮成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：356444