發(fā)布時(shí)間：2017-08-04 06:32

  本文關(guān)鍵詞：Max作用蛋白1-0缺失突變體的構(gòu)建、表達(dá)及細(xì)胞內(nèi)定位的研究

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【摘要】：目的:構(gòu)建Max作用蛋白1-0(Max interacting protein1-0,Mxi1-0)缺失突變體的真核表達(dá)載體并觀察這些突變體在細(xì)胞內(nèi)的定位情況,為研究Mxi1-0細(xì)胞內(nèi)定位與其功能的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。方法:以野生型Mxi1-0真核表達(dá)質(zhì)粒為模板,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增出5種類型Mxi1-0缺失突變體的基因片段,克隆至增強(qiáng)綠色熒光蛋白真核表達(dá)載體,經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定后,利用脂質(zhì)體將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染小鼠胚胎成纖維細(xì)胞株(NIH3T3)。Western blot檢測(cè)融合蛋白的表達(dá),熒光顯微鏡下觀察融合蛋白細(xì)胞內(nèi)定位情況。結(jié)果:各種Mxi1-0缺失突變體經(jīng)測(cè)序鑒定正確后,在NIH3T3中得到表達(dá)。免疫熒光結(jié)果表明,脯氨酸富集結(jié)構(gòu)域(PRD)突變體在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有分布,與Sin3結(jié)合域高度同源結(jié)構(gòu)域(t SID)突變體主要分布于細(xì)胞質(zhì),在細(xì)胞核中有少量分布;PRD-t SID突變體及△PRD突變體分布于細(xì)胞質(zhì),而△PRD-t SID突變體主要分布于細(xì)胞核。結(jié)論:成功構(gòu)建了5種人Mxi1-0缺失突變體的真核表達(dá)載體,并初步觀察這些突變體在細(xì)胞內(nèi)的定位情況,為探尋Mxi1-0在細(xì)胞內(nèi)定位機(jī)制及功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院臨床分子基因檢測(cè)中心;南京醫(yī)科大學(xué)生殖醫(yī)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 基因表達(dá) Max作用蛋白- 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 細(xì)胞內(nèi)定位
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81301822) 南京醫(yī)科大學(xué)科技發(fā)展基金重點(diǎn)項(xiàng)目(2012NJMU088)
【分類號(hào)】：Q78;R3411
【正文快照】： Max作用蛋白1(Max interacting protein 1,Mxi1)是一個(gè)腫瘤抑制基因,參與禽骨髓細(xì)胞瘤病毒癌基因同源物(c-Myc)功能調(diào)節(jié)[1-3]。其堿性螺旋-環(huán)-螺旋亮氨酸拉鏈(b-HLH-ZIP)結(jié)構(gòu)域和c-Myc競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合MYC關(guān)聯(lián)因子X(jué)(Max),抵消c-Myc的促轉(zhuǎn)錄作用。Mxi1的氨基末端有Sin3結(jié)合域(SID),當(dāng)Mx

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：618154