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大鼠正中隆起Nestin,Sox2和BrdU陽(yáng)性細(xì)胞的分布及形態(tài)學(xué)研究

發(fā)布時(shí)間:2017-07-31 18:02

  本文關(guān)鍵詞:大鼠正中隆起Nestin,Sox2和BrdU陽(yáng)性細(xì)胞的分布及形態(tài)學(xué)研究


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【摘要】:目的:觀察正中隆起的Nestin, Sox2, BudU陽(yáng)性細(xì)胞的分布及形態(tài)。 方法:選擇健康SD大鼠30只,體重180-200g,隨機(jī)分成兩組:①正常組(n=15);②模型組(n=15):注射BrdU。 1BrdU標(biāo)記實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制備:分別于16:00和18:00,按照50mg/kg劑量對(duì)模型組的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行腹腔注射BrdU生理鹽水溶液,連續(xù)給藥三天,制備BrdU模型。 2取材和標(biāo)本制備:正常組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物9只,常規(guī)麻醉,經(jīng)心灌注,取材,后固定,浸蠟包埋,選取含正中隆起部分,石蠟切片,厚度為5μm,分別經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色、Nestin和Sox2免疫組織化學(xué)染色;BrdU模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物9只,常規(guī)麻醉,經(jīng)心灌注,取材,固定,浸蠟包埋,,選取含正中隆起部分,石蠟切片,厚度為5μm,進(jìn)行BrdU免疫組織化學(xué)染色,封片后Olympus BX-UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。 3Nestin, Sox2免疫熒光化學(xué)雙標(biāo)染色步驟:正常組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物6只,常規(guī)麻醉,經(jīng)心灌注,取材,后固定,蔗糖浸泡后選取含正中隆起部分,冰凍切片,厚度為8μm,經(jīng)Nestin, Sox2免疫熒光化學(xué)雙標(biāo)染色,50%甘油封片后Olympus BX-UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。 4BrdU, Sox2免疫熒光化學(xué)雙標(biāo)染色:BrdU模型動(dòng)物6只,常規(guī)麻醉,經(jīng)心灌注,取材,后固定,蔗糖浸泡后選取含正中隆起部分,冰凍切片,厚度為8μm,經(jīng)BrdU, Sox2免疫熒光化學(xué)雙標(biāo)染色,50%甘油封片后Olympus BX-UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。 5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:照片的陽(yáng)性細(xì)胞采用專業(yè)圖像分析軟件Image-ProPlus6.0對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞和總細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),計(jì)算陽(yáng)性率。 結(jié)果: 1甲苯胺藍(lán)染色 正常組大鼠下丘腦的冠狀切片顯示正中隆起位于第三腦室的基底部。甲苯胺藍(lán)染色后,細(xì)胞核呈藍(lán)色,尼氏體呈藍(lán)紫色,正中隆起被分為五個(gè)層次:室管膜層、室管膜下層、纖維層、網(wǎng)狀層和柵狀層。正中隆起及第三腦室側(cè)壁的室管膜細(xì)胞分為四種不同形態(tài)。正中隆起的腹側(cè)被腺垂體結(jié)節(jié)部覆蓋,ME含有大量毛細(xì)血管。 2免疫組織化學(xué)染色 2.3Nestin染色:ME中央部2/3的室管膜層和室管膜下層,胞核較大,胞質(zhì)為Nestin強(qiáng)陽(yáng)性;ME兩側(cè)的室管膜層和室管膜下層,胞核較小,胞質(zhì)為Nestin弱陽(yáng)性;ME纖維層和網(wǎng)狀層有散在分布的粗大Nestin陽(yáng)性突起,Nestin陽(yáng)性細(xì)胞胞核較大,散在分布;在柵狀層偶見Nestin陽(yáng)性細(xì)胞,胞核較大。第三腦室單側(cè)側(cè)壁Nestin陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:6.01±5.30%。ME的Nestin陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:42.45±3.42%。 2.2Sox2染色:ME室管膜層和室管膜下層的Sox2免疫陽(yáng)性細(xì)胞緊密排列,ME纖維層和網(wǎng)狀層,Sox2陽(yáng)性細(xì)胞較稀疏。第三腦室單側(cè)側(cè)壁Sox2陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:32.77±7.24%。ME的Sox2陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:48.30±5.66%。 2.3BrdU染色:BrdU陽(yáng)性細(xì)胞在ME的纖維層和網(wǎng)狀層零星分布,少數(shù)位于柵狀層,偶見于室管膜下層。第三腦室單側(cè)側(cè)壁BrdU陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:0.12±0.08%。ME的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:4.17±0.38%。 3免疫熒光化學(xué)染色 3.1Nestin, Sox2雙標(biāo)免疫熒光化學(xué)染色:Nestin陽(yáng)性胞漿呈綠色熒光,Sox2陽(yáng)性胞核呈紅色熒光。Nestin和Sox2雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞在ME中央部2/3的室管膜層和室管膜下層密集分布,在ME纖維層和網(wǎng)狀層分布稀疏。 3.2BrdU, Sox2雙標(biāo)免疫熒光化學(xué)染色:BrdU陽(yáng)性胞核呈綠色熒光,Sox2陽(yáng)性胞核呈紅色熒光。BrdU和Sox2雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞,細(xì)胞核顏色疊加成為黃綠色,在ME纖維層和網(wǎng)狀層零星分布,少數(shù)位于柵狀層,偶見于室管膜下層。 結(jié)論: 1Nestin陽(yáng)性細(xì)胞,在ME的室管膜層和室管膜下層分布密集,在纖維層和網(wǎng)狀層分布稀疏。 2Sox2陽(yáng)性細(xì)胞,在ME室管膜層和室管膜下層分布密集,在纖維層和網(wǎng)狀層分布稀疏;BrdU陽(yáng)性細(xì)胞在纖維層和網(wǎng)狀層零星分布。 3Nestin和Sox2雙標(biāo)細(xì)胞在ME的室管膜層和室管膜下層分布密集,在纖維層和網(wǎng)狀層分布稀疏;BrdU和Sox2雙標(biāo)細(xì)胞在ME的纖維層和網(wǎng)狀層零星分布。
【關(guān)鍵詞】:正中隆起 神經(jīng)干細(xì)胞 伸長(zhǎng)細(xì)胞 Nestin Sox2 BrdU
【學(xué)位授予單位】:河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2013
【分類號(hào)】:R329
【目錄】:
  • 中文摘要4-7
  • 英文摘要7-10
  • 英文縮寫10-11
  • 前言11-12
  • 材料與方法12-19
  • 結(jié)果19-23
  • 附圖23-37
  • 附表37-38
  • 討論38-40
  • 結(jié)論40-41
  • 參考文獻(xiàn)41-43
  • 綜述 正中隆起伸長(zhǎng)細(xì)胞的屏障功能43-56
  • 參考文獻(xiàn)51-56
  • 致謝56-57
  • 個(gè)人簡(jiǎn)歷57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 楊天祝,賈漪濤,馬常升,曹翠麗,李學(xué)平,葛莉;大鼠室周器官的形態(tài)學(xué)觀察[J];河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2002年03期

2 王周南;何澤涌;;伸長(zhǎng)細(xì)胞(綜述)[J];山西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1986年02期

3 劉梅;曹翠麗;馬常升;王麗梅;王榮耕;;實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎大鼠正中隆起室管膜細(xì)胞的變化及意義[J];山東醫(yī)藥;2012年35期



本文編號(hào):600398

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