本文關鍵詞：磷酸二酯酶3對CNP抑制大鼠胃竇平滑肌自發(fā)性收縮運動的影響

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【摘要】：環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)和環(huán)磷酸鳥苷(cyclic guanosine monophosphate, cGMP)是構(gòu)成細胞內(nèi)“第二信使”的兩個重要成員.腺苷酸環(huán)化酶(adenylyl cyclase, AC)和鳥苷酸環(huán)化酶(guanylyl cyclase, GC),可促進細胞內(nèi)cAMP和cGMP的生成,而細胞內(nèi)cAMP和cGMP的濃度則又取決于降解cAMP和cGMP的磷酸二酯酶超家族酶系(Phosphodiesterases, PDEs)的活性。PDEs蛋白家族可通過催化cGMP和cAMP水解而調(diào)節(jié)cAMP和cGMP水平,進而使蛋白磷酸化發(fā)生改變而干預信號轉(zhuǎn)導過程,而PDEs自身也受cGMP和cAMP的調(diào)節(jié)。在胃腸道組織中發(fā)現(xiàn)至少五種磷酸二酯酶亞類型,他們是：(1)Ca2+/CaM刺激性PDE(PDE1);(2)cGMP-激活性PDE(PDE2);(3)cGMP-抑制性PDE(PDE3);(4)cAMP-特異性PDE(PDE4);(5)cGMP-特異性PDE(PDE5)等。C-型鈉尿肽(C-type natriuretic peptide, CNP)通過B型鈉尿肽受體(B-type natriuretic peptide receptor, NPR-B)生成cGMP。存在于胃腸道中的CNP通過CNP-NPR-B/pGC-cGMP信號轉(zhuǎn)導途徑抑制性調(diào)節(jié)胃平滑肌的自發(fā)性活動。因此,推測NPs有可能通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)cGMP濃度的途徑影響PDEs的活性,進而調(diào)節(jié)細胞內(nèi)cAMP濃度,最終對胃平滑肌自發(fā)性收縮運動起調(diào)節(jié)作用�；谝陨系那疤�,本實驗采用離體肌條實驗、酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA),利用不同工具藥(Forskolin; H-89; CNP; IBMX; EHNA; Milrinone)對離體肌條收縮振幅和基線的影響,觀察灌流液中各檢測指標(cGMP和cAMP)的不同含量變化,探討cAMP在大鼠胃竇行行平滑肌的自發(fā)性收縮活動中的作用,并進一步研究PDE是否參與CNP對胃竇行形平滑肌自發(fā)性收縮運動的抑制效應以及相關的傳導途徑。 實驗結(jié)果如下： 1.不同濃度(10-8mol/L,3×10-8mol/L,10-7mol/L)的Forskolin,明顯縮小肌條收縮振幅,明顯下移收縮運動基線(n=6,*P0.05,**P0.01vsControl;#P0.05,##P0.01vs10-8mol/L：P0.05vs3×10-8mmol/L),具有劑量依賴關系；ELISA法測得,cAMP量明顯增加(n=8,*P0.05,**P0.01vs Control;#P0.05,##P0.0l vs10-8mol/L;P0.05vs3×10-8mol/L),具有劑量依賴關系,且胃竇環(huán)行肌條收縮振幅和灌流液中生成的cAMP量呈顯著負相關(r=-0.7,P0.01)；Forskolin對大鼠胃竇環(huán)行平滑肌自發(fā)性收縮活動抑制作用可被PKA抑制劑H-89所阻斷(n=6,*P0.01)。 2.(1)加入CNP前收縮振幅/肌條重量與加入CNP后收縮振幅/肌條重量比較,CNP明顯抑制大鼠胃竇環(huán)行平滑肌的收縮,具有顯著性差異(n=8,*P0.01)。ELISA法測得,加入CNP處理后,cGMP量明顯增多(n=8,*P0.01)；cAMP量明顯增加(n=8,**P0.01)。提示,CNP很可能通過生成cGMP來調(diào)節(jié)PDEs,進而影響到cAMP水平。 (2)在PDE非選擇性抑制劑IBMX存在的基礎上加入CNP后與只加入CNP時比較,收縮振幅抑制率明顯降低,具有顯著性差異(n=8,*P0.01)。ELISA法測定,在IBMX存在下加入CNP后與只加入IBMX時比較,cGMP的含量明顯增多(n=8,#P0.01),但是不能明顯改變cAMP生成量(n=8,P0.05)。表明IBMX抑制胃竇環(huán)行平滑肌的收縮運動,同時一部分阻斷CNP對胃竇環(huán)行平滑肌收縮運動的抑制效應,提示PDEs有可能參與CNP對胃竇環(huán)行平滑肌收縮運動的抑制效應。 (3)在PDE2抑制劑EHNA存在的基礎上加入CNP后與只加入CNP時比較,收縮振幅抑制率無明顯變化(n=8,P0.05)。ELISA法測定,在ENHA存在下加入CNP后與只加入ENHA時比較,cGMP的含量明顯增加(n=8,#P0.05),cAMP的含量明顯增加(n=8,#P0.05)。表明ENHA抑制胃竇環(huán)行平滑肌的收縮運動,而ENHA不能阻斷CNP對胃竇環(huán)行平滑肌收縮運動的抑制效應,提示PDE2不參與CNP對胃竇環(huán)行平滑肌自發(fā)性收縮運動的抑制效應。 (4)在PDE3抑制劑Milrinone存在的基礎上加入CNP后與只加入CNP時比較,收縮振幅抑制率明顯降低,具有顯著性差異(n=8,*P0.01)。ELISA法測定,在Milrinone存在下加入CNP后與只加入Milrinone比較,cGMP的含量明顯增多(n=8,#P0.05)；cAMP的含量無明顯改變(n=8,P0.05)。表明Milrinone可部分阻斷CNP對胃竇環(huán)行平滑肌自發(fā)性收縮運動的抑制作用。提示PDE3參與CNP對胃竇環(huán)行平滑肌自發(fā)性收縮運動的抑制效應。 以上結(jié)果提示： 1.在大鼠胃竇環(huán)行平滑肌細胞,CNP通過GC-cGMP通路抑制PDE3,從而增加細胞內(nèi)cAMP水平； 2.CNP通過GC-cGMP-PDE3信號轉(zhuǎn)導通路調(diào)控cAMP的含量,并與cGMP共同參與抑制大鼠胃竇環(huán)行平滑肌的自發(fā)性收縮運動。
【關鍵詞】：C-型鈉尿肽 環(huán)磷酸腺苷 環(huán)磷酸鳥苷 磷酸二酯酶 胃竇環(huán)行平滑肌 自發(fā)性收縮運動
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R333
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 目錄12-14
• 引言14-16
• 第一章 材料與方法16-20
• 1.1 實驗材料16-17
• 1.1.1 實驗動物16
• 1.1.2 實驗藥品和主要試劑16
• 1.1.3 實驗設備及儀器16-17
• 1.2 實驗方法及觀察項目17-19
• 1.2.1 離體肌條的制備17
• 1.2.2 不同工具藥對離體肌條收縮運動作用記錄17-18
• 1.2.3 測定胃平滑肌肌條灌流液內(nèi)cAMP和cGMP樣本的處理18-19
• 1.2.3.1 胃平滑肌肌條灌流液內(nèi)cGMP用ELISA免疫測定法檢測18-19
• 1.2.3.2 胃平滑肌肌條灌流液內(nèi)cAMP用ELISA免疫測定法檢測19
• 1.3 統(tǒng)計學處理19-20
• 第二章 結(jié)果20-37
• 2.1 cAMP對大鼠胃竇環(huán)行平滑肌自發(fā)性收縮活動的影響20-25
• 2.1.1 Forskolin對大鼠胃竇環(huán)行平滑肌的自發(fā)性收縮活動的影響20
• 2.1.2 加入Forskolin后大鼠胃竇環(huán)行平滑肌灌流液中生成的cAMP量及其與平滑肌收縮抑制率之間的關系20
• 2.1.3 PKA抑制劑H-89對Forskolin抑制大鼠胃竇環(huán)行平滑肌的自發(fā)性收縮活動的影響20-25
• 2.2 CNP對胃竇環(huán)形平滑肌肌條收~.運動及胃竇平滑肌肌組織cGMP和cAMP含量的影響25-28
• 2.3 IBMX對CNP誘導大鼠胃平滑肌肌條收縮運動及胃平滑肌肌組織cGMP和cAMP含量的影響28-31
• 2.4 EHNA對CNP誘導大鼠胃竇平滑肌肌條收縮運動及胃平滑肌肌組織cGMP和cAMP含量的影響31-34
• 2.5 Milrinone對CNP誘導大鼠胃竇平滑肌肌條收縮運動及胃平滑肌肌組織cGMP和cAMP含量的影響34-37
• 第三章 討論37-40
• 3.1 cAMP對大鼠胃竇環(huán)行平滑肌自發(fā)性收縮活動的影響37
• 3.2 PDE亞類型在CNP抑制大鼠胃竇平滑肌自發(fā)性收縮運動中的作用37-40
• 第四章 結(jié)論40-41
• 參考文獻41-44
• 文獻綜述44-56
• 參考文獻52-56
• 致謝56-57
• 功讀學位期間發(fā)表的論文目錄57

【參考文獻】

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本文編號：579639