本文關(guān)鍵詞：穩(wěn)定表達(dá)RFP-GFP-LC3的RAW264.7細(xì)胞株的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的建立能夠穩(wěn)定表達(dá)紅色熒光蛋白-綠色熒光蛋白-微管相關(guān)蛋白輕鏈3(RFP-GFP-LC3)的小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞。方法構(gòu)建含RFP-GFP-LC3基因的慢病毒重組質(zhì)粒載體,將重組質(zhì)粒與慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,收集病毒上清后感染RAW264.7細(xì)胞。經(jīng)嘌呤霉素篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)RFP-GFP-LC3的RAW264.7細(xì)胞株,用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)分析感染效率。饑餓處理穩(wěn)定感染細(xì)胞,熒光顯微鏡下觀察RFP-GFP-LC3斑點(diǎn)。結(jié)果成功構(gòu)建了慢病毒p LV-CMV-RFPGFP-LC3,經(jīng)感染和嘌呤霉素篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)RFP-GFP-LC3的RFP-GFP-LC3-RAW264.7細(xì)胞;熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)顯示RFP和GFP熒光率均達(dá)到100%,饑餓處理后自噬斑點(diǎn)顯著增多。結(jié)論成功建立穩(wěn)定表達(dá)RFP-GFP-LC3的RAW264.7細(xì)胞株,為自噬研究建立了可靠細(xì)胞平臺(tái)。
【作者單位】： 安徽理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)免疫學(xué)與檢驗(yàn)教研室;安徽理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【關(guān)鍵詞】： 自噬 慢病毒 RAW.細(xì)胞 穩(wěn)定表達(dá)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81302524,81202294,81172778) 安徽省自然科學(xué)基金(1208085QH162,KJ2013A105) 大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201310361096,AH201310361188,AH201310361189) 安徽理工大學(xué)大學(xué)生科研項(xiàng)目(2013-2014年)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 自噬是一個(gè)進(jìn)化上高度保守的進(jìn)程,從酵母菌細(xì)胞到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中均已發(fā)現(xiàn)[1]。對(duì)于一些難以降解的胞內(nèi)蛋白、細(xì)胞器或病原體的過度聚集物,自噬是唯一能有效清除這些聚集體的途徑[2]。自噬缺陷會(huì)導(dǎo)致一系列疾病,包括癌癥、神經(jīng)退行性疾病和感染性疾病[3-4]。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,

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10 謝志忠;田s

本文編號(hào)：429418