發(fā)布時間：2017-06-04 10:22

  本文關鍵詞：一種簡便的皮層神經(jīng)元原代培養(yǎng)方法的建立及其培養(yǎng)結果分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的建立一種簡便的皮層神經(jīng)元原代培養(yǎng)方法,并鑒定其培養(yǎng)效果。方法取出生24 h內(nèi)的SD大鼠大腦皮層組織,采用胰酶消化法獲取神經(jīng)元細胞懸液,用10%FBS+DMEM高糖培養(yǎng)基接種在經(jīng)多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)板中,4 h后全量換用Neurobasal+2%B27+0.5 mmol/L谷氨酰胺培養(yǎng)液。培養(yǎng)后采用倒置相差顯微鏡觀察神經(jīng)元形態(tài)變化,連續(xù)觀察8天。神經(jīng)元培養(yǎng)7~8天進行免疫熒光染色,于激光共聚焦顯微鏡下對神經(jīng)元進行鑒定,計算神經(jīng)元密度和純度。結果皮層神經(jīng)元接種時體積小,透亮,呈圓形,單個散在分布。接種后有少量細胞開始貼壁,2 h左右貼壁較多,少量細胞伸出短小的突起;4 h左右已基本貼壁,大量細胞伸出突起,周圍光暈明顯;培養(yǎng)3天時神經(jīng)元突起明顯伸長,相互交織,細胞透亮,立體感強,呈圓形、橢圓形、梭形;培養(yǎng)5~6天時神經(jīng)元體積增大,突起交織成網(wǎng)狀;培養(yǎng)7~8天時,神經(jīng)元細胞體飽滿,細胞質(zhì)透亮,細胞核大而明顯,細胞體周圍折光性強,立體感好,突起交織成致密的網(wǎng)絡結構。經(jīng)免疫熒光染色后鑒定,分離培養(yǎng)的是神經(jīng)元,密度1.5×106個/m L,純度90%。結論成功建立了一種操作簡便的皮層神經(jīng)元培養(yǎng)方法,該方法培養(yǎng)的神經(jīng)元純度高、密度大,可為今后的相關學科研究提供良好的細胞模型。
【作者單位】： 石河子大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院;石河子大學醫(yī)學院;
【關鍵詞】： 皮層神經(jīng)元 原代培養(yǎng) Neurobasal B 細胞模型 新生大鼠
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81360185) 新疆生產(chǎn)建設兵團博士基金資助項目(2011BB016)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 2石河子大學醫(yī)學院)神經(jīng)元具有高度分化、很少分裂的特點,從神經(jīng)突起到成熟神經(jīng)組織分離出神經(jīng)元的過程中,神經(jīng)元會受到不同程度的損傷,因此神經(jīng)元體外原代培養(yǎng)是一項對實驗要求較高、難度較大的培養(yǎng)技術。目前神經(jīng)元原代培養(yǎng)方法很多,傳統(tǒng)方法取材于胎鼠,主要是因為胎鼠胚胎

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