真核細胞的核膜由內(nèi)、外兩層脂質(zhì)膜組成,將細胞核從胞漿內(nèi)分隔出來,形成具有獨立功能的細胞器。依附于核內(nèi)膜下的網(wǎng)狀核纖層結(jié)構(gòu)由核纖層蛋白及其相互作用蛋白復(fù)合物組成,這些蛋白復(fù)合物進一步延伸,在細胞核內(nèi)形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),稱為細胞核骨架。核纖層與核骨架共同為細胞核提供結(jié)構(gòu)支撐,并且在維持正常細胞核功能中發(fā)揮重要作用。BCCIP通過與BRCA2、p21等多種功能蛋白相互作用,在細胞有絲分裂、細胞周期調(diào)控、DNA同源重組修復(fù)、基因組穩(wěn)定性等方面起著重要作用。本論文研究采用免疫共沉淀和GST融合蛋白沉降技術(shù)(GST-pulldown),鑒定了 BCCIP與核纖層蛋白Lamim B1之間的蛋白相互作用。研究中還創(chuàng)新性地構(gòu)建了 BCCIP條件性表達實驗系統(tǒng),并利用該系統(tǒng)深入探索了 BCCIP蛋白的全新功能,即在維持細胞核正常功能過程中的作用。實驗結(jié)果1.構(gòu)建了兩種BCCIP條件性表達實驗系統(tǒng)。(1)構(gòu)建了 BCCIP條件性敲低細胞系(HT-CKD)。該細胞系整合了 U6-LoxP-Neo-LoxP-shRNA 轉(zhuǎn)基因表達盒(transgene expression cassette),表達 Cre 重組酶可以...

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１真核細胞的核膜結(jié)構(gòu)模式圖??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｔｈｅ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｉｌｌｕｓｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｅｎｖｅｌｏｐｅ??

是遺傳物質(zhì)的復(fù)制、膽存、與轉(zhuǎn)錄遺傳信息的主要場所。??從空間上將細胞核與細胞質(zhì)區(qū)分開來的結(jié)構(gòu)稱為細胞核膜（ｎｕｃｌｅａｒ?ｅｎｖｅｌｏｐｅ，?ＮＥ）。??如圖１．１所示，在真核細胞中，細胞核膜由內(nèi)、外兩層平行的脂質(zhì)膜鵬成，并在特定的??細胞周期將細胞核與細胞質(zhì)分瞄開來，從而形成相....

圖１．２?Ｌａｍｉｎ蛋白結(jié)構(gòu)??

哺乳動物細胞中還包括微量的Ｌａｍｉｎ?Ａ－５１０口８］，Ｗ及干細胞特有的Ｌａｍｉｎ?Ｃ２口９］??及?Ｌａｍｉｎ?Ｂ?非０］。??如圖１．２所示，Ｌａｍｉｎ具有共同的一級結(jié)構(gòu)１＂心］，即Ｎ末端結(jié)構(gòu)域（頭部）、中間ａ螺??旋桿狀域和Ｃ末端免疫球蛋白樣折疊結(jié)構(gòu)域（尾部，Ｉｇ－化ｅ化Ｉ....

圖１．３?ＢＣＣＩＰ蛋白結(jié)構(gòu)域示意圖??

組中定位于１０ｑ２６．１［７２］。該基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物經(jīng)選擇性剪切作用產(chǎn)生兩個異構(gòu)體，并且進??一步翻譯成ＢＣＣＩＰ?ａ和ＢＣＣＩＰ?Ｐ兩個蛋白亞型。??ＢＣＣＩＰ蛋白包含Ｈ個主要結(jié)構(gòu)域（圖１．３），即Ｎ末端酸性結(jié)構(gòu)域（Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌＡｃｉｄｉｃ??Ｄｏｍａｉｎ，?ＮＡＤ）、中....

圖３．２?Ｃｒｅ介導(dǎo)的ＢＣＣＩＰ條件性敲低??

Ｕ６－ｐｌｏｘＰｎｅｏ－ＢＣＣＩＰ?ＳｈＲＮＡ轉(zhuǎn)基因表達盒，Ｗ及Ｃｒｅ表達是否能夠介導(dǎo)ＬｏｘＰ位點間??ＤＮＡ重組，有效切除新霉素抗性基因編碼序列。??結(jié)果如圖３．３所示，ｎｅｏ?（－）組均有細胞克隆形成，表明ＹＦＰ或Ｃｒｅ腺病毒感染后??有活細胞被接種至細胞培養(yǎng)皿中。在ＨＴ１０....

本文編號：4048621