目的： DNA疫苗因既能誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答，又能誘導(dǎo)細胞免疫應(yīng)答而受到廣泛關(guān)注，但作為治療性疫苗其免疫效果尚需進一步提高。粒細胞、巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）是一個具有多項潛能的造血生長因子，不僅能刺激造血祖細胞增殖、分化和成熟并從骨髓向外周轉(zhuǎn)移，而且還能活化中性粒細胞、巨噬細胞、DC及其他單核細胞（23），在細胞因子網(wǎng)絡(luò)中占有重要地位，在免疫反應(yīng)中具有重要作用。本課題將GM-CSF基因與乙肝病毒表面抗原（HBsAg）基因融合，構(gòu)建融合乙型肝炎DNA疫苗，旨在借助GM-CSF的免疫佐劑作用，通過基因融合技術(shù)提高乙型肝炎DNA疫苗的免疫效果，為進一步探索乙型肝炎治療性疫苗和融合蛋白疫苗打下基礎(chǔ)。 方法： （1） 用PCR方法和基因克隆技術(shù)，構(gòu)建pcDNA3.1-S、pcDNA3.1-GM-CSF、pcDNA3.1-S-GM-CSF和 pcDNA3.1-GM-CSF-S真核表達質(zhì)粒，分別用酶切和DNA測序進行鑒定； 以上述構(gòu)建的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細胞和COS-7細胞，用ELISA方 ...

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1-3質(zhì)粒pcDNA3.1-S-GM-CSF構(gòu)建路線

33ConstructionwayofplasmidpcDNA3.1-圖1-3質(zhì)粒pcDNA3.1-S-GM-CSF構(gòu)建cDNA3.1及pEcob6的轉(zhuǎn)染菌JM109FpcDNA3.1(+)及pEcob6的小量提取NA3.1-S-GM-CSF的....

圖1-4質(zhì)粒pcDNA3.1-GM-CSF-S構(gòu)建路線

36nstructionwayofplasmidpcDNA3.1-GM-CSF-4質(zhì)粒pcDNA3.1-GM-CSF-S構(gòu)建路線NA3.1-GM-CSF-S的N端片段GM-CSF基因密碼10buffer5ulMgCl23uldNTP1ul

圖2-1pcDNA3.1-GM-CSF轉(zhuǎn)染COS-7細胞的免疫細胞化學(xué)

Fig2-1ImmunocytochemistryofcellstransfectedwithpcDNA3.1-GM-CSF圖2-1pcDNA3.1-GM-CSF轉(zhuǎn)染COS-7細胞的免疫細胞化學(xué)Fig2-2Immunocytochemistryof....

圖2-2pcDNA3.1-GM-CSF-S轉(zhuǎn)染COS-7細胞的免疫細胞化學(xué)

Fig2-2ImmunocytochemistryofcellstransfectedwithpcDNA3.1-GM-CSF-S圖2-2pcDNA3.1-GM-CSF-S轉(zhuǎn)染COS-7細胞的免疫細胞化學(xué)Fig2-3Immunocytochemistry....

本文編號：4046506