目的:探討衰老的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡抗性是否增加且是否通過凋亡抑制蛋白(IAP)家族介導(dǎo)。方法:用DMEM/F12中加入10%胎牛血清(FBS)的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)至第三代,使用D-半乳糖(D-gal)誘導(dǎo)成衰老的BMSC并用β-半乳糖苷酶染色做衰老鑒定。用腫瘤壞死因子α(TNF-α)和環(huán)己酰亞胺(CHX)共同處理正常對(duì)照組與衰老組的BMSC,通過貼壁細(xì)胞計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)其生存率,并通過蛋白印跡法檢測兩組細(xì)胞中Cleaved PARP、Cleaved Caspase3蛋白、IAP家族成員c-IAP1、c-IAP2、XIAP以及衰老相關(guān)標(biāo)志蛋白的水平。再用IAP抑制劑AT-406處理衰老的細(xì)胞,CCK-8檢測處理組以及未處理組細(xì)胞的細(xì)胞活力。最后用凋亡抑制劑z-VAD-fmk和AT-406共同處理正常對(duì)照組與衰老組細(xì)胞,觀察z-VAD-fmk能否減少IAP蛋白被抑制后所引起的細(xì)胞死亡。結(jié)果:與正常對(duì)照組相比,衰老的BMSC中由TNF-α和CHX共同誘導(dǎo)引起的細(xì)胞死亡數(shù)明顯減少,凋亡標(biāo)志物Cleaved PARP和Cleaved Caspase3蛋白的水平降低,而I...

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【文章目錄】：
前言
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 大鼠原代BMSCs的分離培養(yǎng)
    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)
    1.4 CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞增殖活力
    1.5 β-半乳糖苷酶染色
    1.6 Western blot蛋白印跡分析
    1.7 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 D-gal誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞衰老
    2.2 D-gal誘導(dǎo)的衰老細(xì)胞凋亡抗性升高
    2.3 D-gal誘導(dǎo)的衰老細(xì)胞中c-IAP1、c-IAP2和XIAP表達(dá)升高
    2.4 AT-406誘導(dǎo)衰老細(xì)胞凋亡
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