Egr-1介導(dǎo)缺氧復(fù)氧心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激的研究
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【摘要】:目的探討心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧(H/R)時(shí)是否存在異常的ROS/JNK/Egr-1信號(hào)通路。方法將培養(yǎng)的H9c2心肌細(xì)胞隨機(jī)分為以下組別:對(duì)照(control)組、control+ROS激活劑黃嘌呤氧化酶/次黃嘌呤(con+XO/HX)組、H/R組、H/R+ROS清除劑依達(dá)拉奉(EDA)組、H/R+ROS清除劑N-乙;-L-半胱氨酸(NAC)組、H/R+JNK抑制劑SP600125組。建立心肌細(xì)胞H/R模型,采用不同濃度的EDA(2×10-6、2×10-5、2×10-4M)、NAC(5×10-4、2×10-3M、8×10-3M)、XO/HX(1m U/m L/1.2×10-4M,3m U/m L/3.6×10-4M,5m U/m L/6.0×10-4M)、SP600125(2×10-5M)處理細(xì)胞。流式細(xì)胞儀法檢測(cè)H9c2心肌細(xì)胞內(nèi)ROS水平。Western blot方法檢測(cè)心肌細(xì)胞Egr-1、p-JNK、JNK蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果 H/R組ROS水平及Egr-1蛋白表達(dá)均顯著高于control組(P0.05);2種中、高濃度的ROS清除劑EDA和NAC均能明顯降低H/R所致的ROS的高水平和Egr-1蛋白的高表達(dá)(均P0.05)。而2種低劑量的ROS清除劑對(duì)H/R所致的Egr-1蛋白表達(dá)以及ROS水平的影響差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ROS水平與Egr-1蛋白表達(dá)呈高度正相關(guān)(r=0.91,P0.01)。XO/HX各濃度組JNK激活程度顯著高于對(duì)照組,且隨著XO/HX濃度的增加,JNK激活程度越明顯(均P0.05)。H/R組JNK激活水平顯著高于control組,使用ROS清除劑EDA與NAC和JNK抑制劑后,JNK活性明顯降低(P0.05)。H/R組Egr-1蛋白表達(dá)水平顯著高于control組,而JNK抑制劑可以顯著抑制H/R所致Egr-1蛋白的高表達(dá)(P0.05)。結(jié)論 H/R可導(dǎo)致H9c2心肌細(xì)胞ROS/Egr-1信號(hào)通路激活,JNK的活化于此通路中起了重要的介導(dǎo)作用。
【作者單位】: 汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥劑科;汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室;汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院骨科;汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院分析細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】: 缺氧復(fù)氧 氧化應(yīng)激 早期生長(zhǎng)反應(yīng)基因- c-Jun氨基末端激酶 心肌細(xì)胞
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81072633) 2013年汕頭市科技計(jì)劃項(xiàng)目(汕市財(cái)教〔2013〕244號(hào)/73號(hào))
【分類號(hào)】:R329.2
【正文快照】: (1.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥劑科,廣東汕頭515041;2.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室,廣東汕頭515041;3.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院骨科,廣東汕頭515041;4.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院分析細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室,廣東汕頭515041)心肌缺血再灌注(I/R)損傷是心臟缺血性疾病和心臟外科手術(shù)常見(jiàn)的一種病
【共引文獻(xiàn)】
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本文編號(hào):403140
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