本文關(guān)鍵詞：兩種延遲整流鉀通道離子流相互作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景和目的： 延遲整流鉀離子通道（如I_(Kr)和I_(Ks)）同一通道的不同亞基與不同通道間均存在相互作用。通過研究I_(Ks)通道內(nèi)部亞基間不同比例組合的相互作用，比較KCNQ1/KCNE1電流與野生型的I_(Ks)電流的電生理特性。對比共轉(zhuǎn)染的KCNQ1/KCNH2通道與野生型KCNQ1通道及KCNH2通道的電流特征，以進(jìn)一步揭示心律失常的發(fā)病基礎(chǔ)，為其臨床用藥提供理論依據(jù)。 第一部分磁珠標(biāo)記法測定共轉(zhuǎn)染后KCNQ1/KCNE1通道電流 方法： 利用免疫磁珠陽性標(biāo)記法制作KCNQ1/KCNE1通道表達(dá)系統(tǒng)，測定通道電流的I-V曲線、穩(wěn)態(tài)激活曲線和激活時(shí)間常數(shù)等，比較其與WT-KCNQ1通道電流的區(qū)別，探討KCNQ1/KCNE1通道亞基間不同比例組合時(shí)的電流特性。 結(jié)果： 采用35mm平皿，2ug質(zhì)粒，5ul lipofectamine轉(zhuǎn)染試劑，在48-72h時(shí)細(xì)胞陽性率可達(dá)10~15%。記錄KCNQ1/KCNE1通道電流，比較亞基間不同比例組合下電流密度，在比例達(dá)到1:3時(shí)達(dá)到高峰；穩(wěn)態(tài)激活曲線與波爾茲曼方程良好擬合，V_(1/2)及斜率（k）均比WT-KCNQ1通道的值大；滅活時(shí)間常數(shù)Tau1和Tau2均較大，，滅火時(shí)間長；KCNQ1/KCNE1（1:3）通道的激活時(shí)間常數(shù)Tau值隨著電壓的增加而不斷增大。 結(jié)論： 1.細(xì)胞最佳的轉(zhuǎn)染配比為2ug質(zhì)粒，5ul lipofectamine轉(zhuǎn)染試劑，當(dāng)KCNQ1:KCNE1比例為1:3時(shí)，此組合的電流與經(jīng)典的Iks電流最接近。 2.所記錄的KCNQ1/KCNE1通道（α：β=1:3）電流密度比WT-KCNQ1 通道大，說明KCNE1通道蛋白的表達(dá)量與I_(Ks)電流密度成正比。 3. KCNQ1/KCNE1通道門控動(dòng)力學(xué)特性與WT-KCNQ1通道完全相反，卻與經(jīng)典的Iks電流一致，即表現(xiàn)出慢激活、慢滅火和基本上無失火的電流特征。 4.電流密度和門控動(dòng)力學(xué)的改變與KCNQ1/KCNE1通道內(nèi)部亞基間相互作用密不可分。 第二部分WT-KCNQ1/KCNH2通道的電生理特征的研究及比較 方法： 利用免疫磁珠陽性標(biāo)記表達(dá)系統(tǒng)記錄WT-KCNQ1/KCNH2通道電流，分別比較其與WT-KCNQ1通道及WT-KCNH2通道電流的區(qū)別，揭示不同延遲整流鉀通道間的相互作用，及與心律失常的發(fā)生機(jī)制相關(guān)。 結(jié)果： KCNQ1/KCNH2通道在KCNQ1通道蛋白的作用下電流密度均明顯增加，且在刺激電壓20mV以上時(shí)出現(xiàn)明顯的內(nèi)向整流特性；當(dāng)刺激電位為-40mV~+60mV系列脈沖刺激時(shí)，通道穩(wěn)態(tài)激活曲線與波爾茲曼方程擬合效果良好，其V_(1/2)=-0.92331±2.22338mV，k=9.58502±2.03137mV；在20mV時(shí)激活時(shí)間常數(shù)Tau值開始迅速下降，這與其峰值電流的I-V曲線相吻合。 結(jié)論： 1. KCNQ1/KCNH2鉀通道的電流密度比野生型的大，但未改變其內(nèi)向整流特性。說明KCNQ1通道蛋白的協(xié)同作用，能明顯改變KCNH2通道電流的曲線形狀和峰值。 2. KCNQ1/KCNH2鉀通道的穩(wěn)態(tài)激活曲線與波爾茲曼方程擬合效果良好，滅火時(shí)間常數(shù)和激活時(shí)間常數(shù)明顯較單獨(dú)的野生型通道大。 3.共轉(zhuǎn)染后通道的動(dòng)力學(xué)改變說明鉀通道的不同通道(IKs和I_(Kr))間電流存在相互作用、相互影響。
【關(guān)鍵詞】：KCNQ1/KCNE1通道 KCNQ1/KCNH2通道 共轉(zhuǎn)染 相互作用 心律失常
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 第一部分：IKs 通道內(nèi)部亞基間不同比例相互作用的研究9-26
• 前言9
• 一、材料與方法9-13
• 二、結(jié)果13-24
• 三、討論24-26
• 第二部分：兩種延遲整流鉀通道離子流相互作用的研究26-42
• 前言26
• 一、材料與方法26-30
• 二、結(jié)果30-40
• 三、討論40-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 致謝46-47
• 綜述：心臟鉀通道各離子流間相互作用的研究進(jìn)展47-53
• 參考文獻(xiàn)51-53

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：兩種延遲整流鉀通道離子流相互作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：402433