為探討CP2/P30基因?qū)ξ⑿‰[孢子蟲的免疫保護作用,本研究在已知CP2,P30基因序列的基礎(chǔ)上設(shè)計引物,采用DNA重組技術(shù)將CP2,P30基因及兩基因串聯(lián)基因與真核表達載體pVAX-1相連,構(gòu)建重組真核表達載體,并將兩基因單獨及串聯(lián)克隆入原核表達載體PET28-a中,構(gòu)建原核表達載體。用重組真核表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,用間接免疫熒光方法驗證其在真核細(xì)胞中的表達;將原核表達載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌中表達出重組CP2,P30及CP2/P30蛋白。將核酸疫苗與亞單位疫苗分別免疫小鼠和懷孕期的山羊檢測其免疫保護力。結(jié)果表明,擴增CP2,P30開放閱讀框,經(jīng)Blast比對顯示同源性分別為99.41%和99.91%,酶切鑒定后表明載體構(gòu)建成功。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的Hela細(xì)胞后,用間接免疫熒光方法在轉(zhuǎn)染后的Hela細(xì)中檢測到特異蛋白。提取總蛋白進行SDS-PAGE檢測到與目的蛋白大小相符的蛋白條帶,通過Western blot試驗證實所得蛋白具有反應(yīng)原性;核酸疫苗免疫保護結(jié)果表明,試驗組與對照組相比,特異性抗體滴度、CD4⁺與CD8⁺T淋巴細(xì)胞數(shù)均差異極顯著(...

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