細(xì)胞鉆細(xì)胞（cell-in-cell）是指一個或多個細(xì)胞進入到另一個細(xì)胞的胞漿內(nèi)，形成細(xì)胞套疊結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象（下文以“效應(yīng)細(xì)胞”表示鉆入另一細(xì)胞中的細(xì)胞；“靶細(xì)胞”表示被鉆入的外層細(xì)胞）。Cell-in-cell從效靶細(xì)胞種類可以分為同質(zhì)cell-in-cell和異質(zhì)cell-in-cell；而從生物學(xué)特征及意義可以分為cannibalism，entosis和emperipolesis。我們的研究團隊主要是對于emperipolesis，即淋巴細(xì)胞進入各種腫瘤細(xì)胞進行了較為深入的研究。 以往cell-in-cell的研究大多是建立在單個細(xì)胞水平上，我們試圖從群體水平建立異質(zhì)cell-in-cell的研究方法。首先，我們運用熒光染色和流式細(xì)胞儀檢測異質(zhì)cell-in-cell形成率，與人工計數(shù)方法相比具有高度擬合性（r2=0.9918），同時這一方法具有高效、準(zhǔn)確、重復(fù)性好的特點；其次，我們用這一方法與人工計數(shù)檢測了多個效靶細(xì)胞形成cell-in-cell的概率，說明其具有普適性。再次，我們用流式細(xì)胞儀能夠分選出高純度（約為85%）的cell-in-cell細(xì)胞群，將這一細(xì)胞群繼續(xù)培養(yǎng)后對其...

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摘要
Abstract
中英文對照和縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 Cell-in-cell生物學(xué)結(jié)構(gòu)的研究
        1.1.1 Cell-in-cell形態(tài)學(xué)特征和分類
        1.1.2 Cell-in-cell的形成機制及命運
        1.1.3 Cell-in-cell的生物學(xué)功能及意義
    1.2 Cell-in-cell的研究方法
        1.2.1 在單個細(xì)胞水平cell-in-cell的方法學(xué)建立
        1.2.2 在群體水平cell-in-cell的方法學(xué)建立
    1.3 Cell-in-cell與單克隆抗體治療
        1.3.1 單克隆抗體抗腫瘤機制
        1.3.2 單克隆抗體的臨床應(yīng)用
    1.4 本課題的目的意義和研究內(nèi)容
        1.4.1 目的意義
        1.4.2 研究內(nèi)容
第二章 Emperipolesis的流式檢測與分選方法學(xué)建立
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 Emperipolesis反應(yīng)體系的建立
        2.2.3 Emperipolesis人工計數(shù)
        2.2.4 Emperipolesis流式計數(shù)與分選
        2.2.5 Giemsa染色
        2.2.6 活細(xì)胞實時觀測和縮時電影攝制
        2.2.7 異質(zhì)cell-in-cell單個細(xì)胞分選及克隆團形成
        2.2.8 殺傷實驗（LDH釋放法）
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 單細(xì)胞懸液制備的優(yōu)化
        2.3.2 運用熒光染色和流式雙色分析檢測并分選Emperipolesis形成的cell-in-cell結(jié)構(gòu)
        2.3.3 測定流式細(xì)胞儀檢測異質(zhì)cell-in-cell細(xì)胞群的準(zhǔn)確率
        2.3.4 流式檢測及人工計數(shù)不同效靶細(xì)胞通過emperipolesis形成異質(zhì)cell-in-cell概率
        2.3.5 流式分選的cell-in-cell細(xì)胞群的二次cell-in-cell形成及殺傷敏感性
        2.3.6 檢測流式分選的cell-in-cell細(xì)胞群與EMT轉(zhuǎn)化
    2.4 本章小結(jié)
第三章 異質(zhì)cell-in-cell的形態(tài)及動力學(xué)研究
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 異質(zhì)cell-in-cell檢測
        3.2.3 表面生物素�；�
        3.2.4 Lyso Tracker和Mito Tracker染色
        3.2.5 透射電鏡標(biāo)本的制作
        3.2.6 縮時顯微攝影time-lapse技術(shù)
        3.2.7 免疫熒光染色
        3.2.8 Wsetern blot
        3.2.9 Transwell方法檢測細(xì)胞遷移率
        3.2.10 細(xì)胞饑餓實驗
        3.2.11 趨化因子檢測
        3.2.12 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.2.13 流式細(xì)胞術(shù)檢測樣品
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 Cell-in-cell形態(tài)學(xué)研究
        3.3.2 Cell-in-cell有別于細(xì)胞吞噬
        3.3.3 效應(yīng)細(xì)胞在cell-in-cell形成中的極化
        3.3.4 細(xì)胞骨架重排影響效應(yīng)細(xì)胞在cell-in-cell形成中的極化
        3.3.5 信號通路影響效應(yīng)細(xì)胞極化
        3.3.6 趨化因子影響效應(yīng)細(xì)胞極化
    3.4 本章小結(jié)
第四章 異質(zhì)cell-in-cell的細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 異質(zhì)cell-in-cell檢測
        4.2.3 效靶細(xì)胞死亡計數(shù)
        4.2.4 Lyso Tracker和Mito Tracker染色
        4.2.5 PEG誘導(dǎo)多倍體形成
        4.2.6 縮時顯微攝影time-lapse技術(shù)
        4.2.7 免疫熒光染色
        4.2.8 囊泡形成的計數(shù)
        4.2.9 多倍體分選
        4.2.10 組織標(biāo)本的處理及HE染色
        4.2.11 組織切片免疫熒光染色
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 Cell-in-cell與效應(yīng)細(xì)胞胞內(nèi)分裂
        4.3.2 異質(zhì)cell-in-cell與靶細(xì)胞異倍體形成
        4.3.3 異質(zhì)cell-in-cell與多倍體靶細(xì)胞
        4.3.4 異質(zhì)cell-in-cell與效靶細(xì)胞死亡
        4.3.5 囊泡與異質(zhì)Cell-in-cel的效靶細(xì)胞死亡
        4.3.6 Cell-in-cell與疾病
    4.4 本章小結(jié)
第五章 抗體介導(dǎo)的cell-in-cell效應(yīng)
    5.1 前言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 實驗材料
        5.2.2 PBMC的提純
        5.2.3 乳腺癌細(xì)胞抗原檢測
        5.2.4 PBMC的(Fc-gamma receptors) FcγRⅢ測定
        5.2.5 ADCC檢測
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 檢測靶細(xì)胞Her2 抗原及效應(yīng)細(xì)胞Fc受體的表達(dá)
        5.3.2 不同抗體濃度下的ADCC及cell-in-cell效應(yīng)
        5.3.3 不同作用時間下的ADCC及cell-in-cell效應(yīng)
        5.3.4 抗體介導(dǎo)的異質(zhì)cell-in-cell的胞內(nèi)殺傷和胞內(nèi)死亡
        5.3.5 囊泡對抗體介導(dǎo)的胞內(nèi)殺傷和胞內(nèi)死亡的影響
    5.4 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
    結(jié)論
    創(chuàng)新性成果
    展望
參考文獻
攻讀博士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件



本文編號：3940958