作為腸道細菌,鼠傷寒沙門菌(Salmonella spp.)需要克服胃中酸性環(huán)境,才能進一步入侵宿主腸道上皮細胞。已有研究表明,沙門菌已經(jīng)進化出多種應(yīng)答機制,增強自身在酸性環(huán)境下的生存。對于沙門茵抗酸機制研究最多的是酸耐受應(yīng)答(Acid tolerance response, ATR).ATR指經(jīng)過弱酸的適應(yīng),在隨后的致死酸性條件下細菌存活能力增強的現(xiàn)象。因而,經(jīng)過ATR的沙門菌可以更好地抵御胃酸,增加入侵力以及毒力,導(dǎo)致人或其他宿主患病的幾率升高[1]。目前,兩個pH依賴的ATR已經(jīng)知道,即對數(shù)期ATR和平臺期ATR。在這兩個過程中都需要誘導(dǎo)合成多種酸激蛋白(Acid shock proteins, ASPs),保護和修復(fù)在酸壓力下受到損傷的大分子,這些大分子分別在沙門菌的不同生長時期發(fā)揮著作用。同時沙門菌還具有賴氨酸和精氨酸兩種脫羧系統(tǒng),該系統(tǒng)利用氨基酸轉(zhuǎn)運泵將胞內(nèi)的曠泵出體外,從而在強酸下維持胞內(nèi)pH相對穩(wěn)定。原核生物的乙酰化研究主要是對沙門茵的研究。在沙門茵體內(nèi),cobB負責(zé)編碼Sir2同源蛋白,行使去乙�；δ�；pat編碼乙酰基轉(zhuǎn)移酶(YfiQ),具有乙�；δ躘2]�；谏�...

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號與縮略語說明
第一章 文獻綜述
    1 沙門菌對酸性壓力的應(yīng)答機理
        1.1 鼠傷寒沙門菌的概述
        1.2 鼠傷寒沙門菌酸耐受
        1.3 展望
    2 蛋白質(zhì)乙�；揎椷M展
        2.1 真核生物乙�；揎�
        2.2 原核生物乙�；揎�
    3 本研究的目的及主要內(nèi)容
        3.1 研究目的
        3.2 主要內(nèi)容
第二章 鼠傷寒沙門菌乙�；�/去乙�；妇幋a基因pat/cobB敲除株構(gòu)建
    1 實驗材料
        1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.2 培養(yǎng)基
        1.3 酶、抗生素和化學(xué)試劑
        1.4 主要儀器
    2 方法
        2.1 質(zhì)粒DNA的小量提取
        2.2 打靶分子DNA片段擴增
        2.3 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞制備和轉(zhuǎn)化
        2.4 制備含pKD46的沙門菌感受態(tài)細胞
        2.5 打靶分子DNA片段轉(zhuǎn)化
        2.6 重組克隆的鑒定
        2.7 氯霉素抗性消除
    3 實驗結(jié)果
        3.1 擴增敲除片段
        3.2 同源重組
        3.3 消除抗性
    4 討論
第三章 鼠傷寡沙門菌酸耐受應(yīng)答檢測
    1 實驗材料
        1.1 菌株
        1.2 培養(yǎng)基
        1.3 化學(xué)試劑
        1.4 主要儀器
    2 實驗方法
        2.1 生長曲線測定
        2.2 對數(shù)期酸耐受應(yīng)答檢測
        2.3 平臺期酸耐受應(yīng)答檢測
    3 實驗結(jié)果
        3.1 敲除前后菌株長勢無差異
        3.2 對數(shù)期ATR
        3.3 平臺期ATR
    4 討論
第四章 鼠傷寒沙門菌酸抗檢測
    1 實驗材料
        1.1 菌株
        1.2 質(zhì)粒
        1.3 試劑和酶
        1.4 引物
    2 實驗方法
        2.1 菌株構(gòu)建
        2.2 轉(zhuǎn)化
        2.3 對數(shù)期抗酸檢測
        2.4 平臺期抗酸檢測
        2.5 誘導(dǎo)Pat時抗酸檢測
    3 實驗結(jié)果
        3.1 pQE80YX1-pat構(gòu)建
        3.2 對數(shù)期抗酸
        3.3 平臺期抗酸
        3.4 誘導(dǎo)Pat時對數(shù)期抗酸
        3.5 誘導(dǎo)Pat時平臺期抗酸
    4 討論
第五章 鼠傷寒沙門菌酸環(huán)境下乙�；V的變化
    1 實驗材料
        1.1 菌株
        1.2 試劑
        1.3 儀器
    2 實驗方法
        2.1 細菌培養(yǎng)
        2.2 細胞裂解物的制備
        2.3 免疫印跡試驗(western blotting)
    3 賴氨酸乙�；揎椀拿庖哂≯E結(jié)果
    4 討論
第六章 鼠傷寒沙門菌胞內(nèi)pH檢測
    1 實驗材料
        1.1 質(zhì)粒
        1.2 抗生素和化學(xué)試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 標準曲線繪制
        2.2 細菌胞內(nèi)pH測量
    3 實驗結(jié)果
        3.1 pH-相對熒光強度標準曲線
        3.2 胞內(nèi)pH測量
    4 討論
第七章 鼠傷寒沙門菌應(yīng)對酸壓力的相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平檢測
    1 實驗材料
        1.1 菌株
        1.2 試劑
        1.3 主要儀器
    2 實驗方法
        2.1 細菌培養(yǎng)
        2.2 RNA抽提
        2.3 總RNA的定量
        2.4 逆轉(zhuǎn)錄
        2.5 Quantitative Real-time PCR
    3 實驗結(jié)果
        3.1 RNA抽提
        3.2 Quantitative Real-time PCR
    4 討論
第八章 全文總結(jié)和討論
    1 全文總結(jié)
    2 討論
參考文獻
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3835088