本文關(guān)鍵詞：pre-B細(xì)胞中CTCF介導(dǎo)沉默子Sis和增強(qiáng)子Ei相互作用并抑制VJ重排，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：真核細(xì)胞基因表達(dá)的精確調(diào)控需要順勢(shì)調(diào)控元件之間以及順式調(diào)控元件和啟動(dòng)子之間發(fā)生直接的相互作用,這種相互作用使得基因在特定的狀態(tài)下呈現(xiàn)特定的染色質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)。小鼠免疫球蛋白輕鏈kappa(Igκ)基因是研究細(xì)胞分化過程中染色質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)變化的理想模型。Igκ基因包含95個(gè)功能VK基因,4個(gè)功能JK基因,以及一個(gè)CK基因。目前已發(fā)現(xiàn)的Igκ因順式調(diào)控元件包括沉默子Sis,位于內(nèi)含子區(qū)域的增強(qiáng)子(Ei),3’增強(qiáng)子(E3’)和下游增強(qiáng)子(Ed)。前B細(xì)胞(pre-B細(xì)胞)中,VK基因帶著自身啟動(dòng)子半隨機(jī)地重排到任意的JK區(qū)域,并起始轉(zhuǎn)錄。Sis和Ei具有調(diào)節(jié)VJ重排的功能,Sis通過將Igκ基因定位到異染色質(zhì)抑制VJ重排,而Ei通過促進(jìn)"germline transcription"促進(jìn)VJ重排。 CCCTC位點(diǎn)結(jié)合蛋白CTCF具有高度保守的鋅指結(jié)構(gòu),并在基因表達(dá)調(diào)控中有重要作用,如調(diào)控基因活化和沉默,參與基因印記等。此外CTCF還能介導(dǎo)形成染色質(zhì)內(nèi)部及染色質(zhì)之間的相互作用。有報(bào)道推測(cè)在pre-B細(xì)胞中CTCF結(jié)合在Sis上,然而CTCF是否介導(dǎo)Igκ基因的染色質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu),是否調(diào)控VJ的重排依然不是很清楚。 通過染色質(zhì)構(gòu)象捕獲技術(shù)(3C)我們發(fā)現(xiàn)在pre-B細(xì)胞中Sis與Ei之間發(fā)生直接的相互作用,Igκ因形成一個(gè)染色質(zhì)環(huán),而在pro-B細(xì)胞中則不存在這種直接的相互作用。通過shRNA下調(diào)CTCF的表達(dá),我們發(fā)現(xiàn)Ei-Sis之間的相互作用消失,同時(shí)"germline transcription"增強(qiáng),VJ重排增強(qiáng)。這些結(jié)果說明CTCF是介導(dǎo)Ei-Sis相互作用的關(guān)鍵蛋白,而增強(qiáng)子和沉默子之間的相互作用能夠抑制增強(qiáng)子的功能。因此,我們認(rèn)為CTCF通過介導(dǎo)Sis與Ei之間的相互作用,抑制了"germline transcription"進(jìn)而抑制vJ重排,參與等位基因互斥調(diào)控中的單等位基因沉默效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：染色質(zhì)構(gòu)象捕獲 轉(zhuǎn)錄因子 CTCF 沉默子Sis 增強(qiáng)子Ei VJ重排
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R3411
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 縮略語(yǔ)表8-9
• 前言9-12
• 研究現(xiàn)狀、成果9-11
• 研究目的、方法11-12
• 1 對(duì)象和方法12-36
• 1.1 染色質(zhì)構(gòu)象捕獲技術(shù)對(duì)象和方法12-20
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料12-15
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)原理15-16
• 1.1.3 技術(shù)流程16-19
• 1.1.4 對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)立19-20
• 1.2 染色體免疫共沉淀技術(shù)對(duì)象和方法20-26
• 1.2.1 染色體免疫共沉淀技術(shù)實(shí)驗(yàn)材料20-22
• 1.2.2 染色體免疫共沉淀技術(shù)實(shí)驗(yàn)原理22-23
• 1.2.3 染色體免疫共沉淀（Chip)技術(shù)流程23-26
• 1.3 shRNA下調(diào)CTCF表達(dá)技術(shù)對(duì)象和方法26-32
• 1.3.1 ShRNA下調(diào)CTCF表達(dá)技術(shù)實(shí)驗(yàn)材料26-29
• 1.3.2 shRNA質(zhì)粒的構(gòu)建29-31
• 1.3.3 iCTCF-shRNA慢病毒產(chǎn)生和70Z/3細(xì)胞的感染31-32
• 1.3.4 Western Blot檢測(cè)CTCF的基因沉默水平32
• 1.4 Igκ基因重排實(shí)驗(yàn)對(duì)象和方法32-36
• 1.4.1 lgx互基因重排實(shí)驗(yàn)材料32-34
• 1.4.2 細(xì)胞總RNA的提取及Real-time PCR檢測(cè)34-35
• 1.4.3 PCR檢測(cè)V_κ的重排35-36
• 2 結(jié)果36-43
• 2.1 Sis和Ei僅在pre-B細(xì)胞中存在相互作用36-39
• 2.1.1 3C對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)立36-37
• 2.1.2 pro-B細(xì)胞38B9中Sis和Ei不存在相互作用37-38
• 2.1.3 pre-B細(xì)胞70Z/3中Sis和Ei存在相互作用38-39
• 2.2 在70Z/3細(xì)胞中CTCF結(jié)合于Sis片段39
• 2.3 shRNA質(zhì)粒的構(gòu)建39-41
• 2.3.1 pSPR-iCTCF質(zhì)粒的鑒定39-40
• 2.3.2 277-iCTCF質(zhì)粒的鑒定40-41
• 2.4 70Z/3細(xì)胞中CTCF下調(diào)后Sis與Ei相互作用消失41-42
• 2.5 CTCF通過抑制Igκ基因germline的轉(zhuǎn)錄從而抑制VJ重排42-43
• 3 討論43-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明50-51
• 綜述51-63
• 綜述參考文獻(xiàn)58-63
• 致謝63

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：382900