研究背景： 胃癌是消化道最常見的惡性腫瘤，嚴重危害著人類健康。體細胞發(fā)生癌變后，機體主要依靠獲得性免疫監(jiān)視功能對其進行免疫清除，在這一免疫功能中抗原提呈細胞起著關鍵性的作用。樹突狀細胞是目前發(fā)現(xiàn)的抗原提呈功能最強的抗原提呈細胞。另一方面，癌細胞還可分泌免疫抑制因子如胃腸激素血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)等導致機體免疫障礙，最終得以保存自身。有研究提示VIP經(jīng)過PI3K/Akt信號通路參與機體多種功能的調(diào)節(jié)，且PI3K/Akt信號通路在樹突狀細胞（dendritic cells, DCs）分化、生存、分泌細胞因子等方面均有重要作用。因此推測，VIP可能通過影響DCs中PI3K/Akt信號通路參與調(diào)控了胃癌的抗原提呈過程。 目的： 探討VIP對PI3K/Akt信號通路的影響在DCs胃癌抗原提呈中的作用。 方法： 通過藥物干預及MKN45共孵育實驗，使用兩種方法（RT-PCR及免疫細胞化學）檢測VIP、LY294002（2-（4-嗎啉基）-8-苯基-4氫-1-苯并吡喃-4-酮）干預及MKN45共孵育對臍帶血來源DCs中PI3K/Akt信號通...

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【學位級別】：碩士

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摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞株
        2.1.2 標本采集
        2.1.3 儀器設備
    2.2 實驗主要試劑和溶液配制
        2.2.1 MKN45 培養(yǎng)主要試劑
        2.2.2 DCs 分離、純化、培養(yǎng)、鑒定主要試劑
        2.2.3 藥物干預實驗所需要的主要試劑
        2.2.4 RT-PCR 所需要的主要試劑
        2.2.5 免疫細胞化學染色所需要的主要試劑
        2.2.6 實驗主要試劑配制方法
    2.3 實驗方法
        2.3.1 胃癌細胞株 MKN45 培養(yǎng)
        2.3.2 實驗流程圖及分組
        2.3.3 DCs 的分離、純化、培養(yǎng)及鑒定
        2.3.4 藥物干預及 MKN45 共孵育試驗
        2.3.5 目的基因 mRNA 表達的檢測（RT-PCR 方法）
        2.3.6 檢測目的基因的蛋白表達（免疫細胞化學方法）
    2.4 圖像處理及分析方法
    2.5 統(tǒng)計學處理
    2.6 倫理學問題
第3章 結果
    3.1 LPS 誘導 DCS 成熟實驗結果
        3.1.1 DCs 的形態(tài)學觀察結果
        3.1.2 LPS 誘導 DCs 成熟相關分子表達檢測結果
    3.2 藥物干預及 MKN45 共孵育后 DCs 中目的基因 mRNA 及蛋白的表達
        3.2.1 VIP、LY294002 干預及 MKN45 共孵育后 DCs 中β-actin mRNA 表達
        3.2.2 VIP、LY294002 干預及 MKN45 共孵育后 DCs 中 CD80 mRNA 及蛋白的表達
        3.2.3 VIP、LY294002 干預及 MKN45 共孵育后 DCs 中 CD86 mRNA 及蛋白的表達
        3.2.4 VIP、LY294002 干預及 MKN45 共孵育后 DCs 中 CD40 mRNA 及蛋白的表達
        3.2.5 VIP、LY294002 干預及 MKN45 共孵育后 DCs 中 MHC-ⅡmRNA 及蛋白的表達
        3.2.6 VIP、LY294002 干預及 MKN45 共孵育后 DCs 中 PI3K p85 mRNA 及蛋白表達
        3.2.7 VIP、LY294002 干預及 MKN45 共孵育后 DCs 中 Akt mRNA 及蛋白的表達
        3.2.8 VIP、LY294002 干預及 MKN45 共孵育后 DCs 中 p-Akt(Ser473)蛋白的表達
第4章 討論
    4.1 DCS 成熟過程中細胞內(nèi)抗原提呈相關分子表達變化
    4.2 VIP 干預及 MKN45 共孵育后 DCS 中抗原提呈相關分子變化
    4.3 VIP、LY294002 干預及 MKN45 共孵育后 DCS 中 PI3K/AKT 信號通路變化
    4.4 LY294002 干預 DCS 后抗原提呈相關分子變化
第5章 結論
致謝
參考文獻
綜述
    參考文獻



本文編號：3798120