本文關(guān)鍵詞：三株嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體AnkA蛋白原核表達(dá)及免疫原性差異性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體（Anaplasmaphagocytophilum）屬于立克次體目無(wú)形體科無(wú)形體屬，是一類(lèi)直徑為0.2-1.0um的經(jīng)蜱傳播的嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性菌，主要引起人粒細(xì)胞無(wú)形體�。℉umanGranulocyticAnaplasmosis，HGA）。自20世紀(jì)90年代初于美國(guó)首次發(fā)現(xiàn)以來(lái)，澳洲、歐洲多國(guó)、韓國(guó)及我國(guó)先后均有報(bào)道，且近年來(lái)呈上升趨勢(shì)。2006年安徽蕪湖弋磯山醫(yī)院的人粒細(xì)胞無(wú)形體病院內(nèi)傳播感染事件是我國(guó)第一次報(bào)道的人粒細(xì)胞無(wú)形體病感染確診病例，也是世界范圍內(nèi)首次報(bào)導(dǎo)的人粒細(xì)胞無(wú)形體人傳人事件。由于該病的臨床多表現(xiàn)為急性不明原因發(fā)熱，肌肉痛，乏力，頭痛等類(lèi)似病毒感染性疾病癥狀，臨床缺乏對(duì)該病的足夠認(rèn)識(shí)，也缺乏相應(yīng)的快速診斷方法，因此該病及易發(fā)生誤診，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致多器官功能衰竭，甚至死亡。 為探索人源無(wú)形體不同分離株AnkA蛋白免疫原性是否存在差異，進(jìn)一步揭示這些蛋白質(zhì)間可能存在結(jié)構(gòu)及免疫表位差異以及可能相關(guān)的與宿主細(xì)胞作用蛋白譜差異。首先利用DNAMAN軟件比對(duì)美國(guó)Webster株、斯洛文尼亞1567株和美國(guó)96HE58株人源無(wú)形體分離株AnkA蛋白氨基酸序列，結(jié)果發(fā)現(xiàn)三株菌AnkA蛋白的一致性為90.2%，Webster株與96HE58株AnkA蛋白的一致性最高，為95.2%，1567株和96HE58株AnkA蛋白的一致性最低，為90.6%。對(duì)這三株無(wú)形體AnkA蛋白B淋巴細(xì)胞線(xiàn)性表位預(yù)測(cè)分析發(fā)現(xiàn)Webster株和96HE58株人分離株無(wú)形體AnkA蛋白抗原表位存在一個(gè)差異，而它們與1567株AnkA蛋白抗原表位預(yù)測(cè)結(jié)果差異較大。 我們對(duì)3株無(wú)形體不同ankA基因進(jìn)行了原核表達(dá)，同時(shí)進(jìn)行了免疫原性初步分析。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增了嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體Webster株，斯洛文尼亞1567株，美國(guó)96HE58株ankA基因部分序列，構(gòu)建pET-30a-AnkA表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21中，以IPTG誘導(dǎo)高效表達(dá)融合蛋白，經(jīng)飛行質(zhì)譜鑒定氨基酸序列，免疫BALB/c小鼠制備多克隆抗體。采用ELISA和Westernblot方法分析三株菌AnkA重組蛋白與免疫小鼠血清抗體相互間，以及與10種常見(jiàn)的立克次體目成員陽(yáng)性抗體鼠血清間的免疫反應(yīng)。同時(shí)檢測(cè)三株菌AnkA重組蛋白與我國(guó)無(wú)形體病人血清抗體反應(yīng)性。結(jié)果表明表達(dá)的重組蛋白主要以可溶性形式存在，小鼠免疫獲得高效價(jià)抗AnkAIgG抗體，三株菌重組蛋白免疫抗體之間存在免疫交叉性，與立克次體目成員間存在免疫交叉性。三株菌重組蛋白與我國(guó)無(wú)形體病人血清抗體存在免疫反應(yīng)。 本研究成功原核表達(dá)并純化了三株嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體AnkA蛋白，重組蛋白與我國(guó)無(wú)形體病人陽(yáng)性血清存在免疫反應(yīng)。三株嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體AnkA重組蛋白與免疫小鼠多克隆抗體之間存在交叉反應(yīng)，通過(guò)Westernblot和ELISA方法得到人源無(wú)形體不同分離株AnkA蛋白質(zhì)之間的免疫原性差異不顯著，表明它們之間的空間結(jié)構(gòu)及其相似，抗原表位差異較�。煌ㄟ^(guò)與立克次體目成員免疫反應(yīng)存在免疫交叉反應(yīng)表明該重組蛋白無(wú)較好的特異性，不適合應(yīng)用于鑒別診斷。
【關(guān)鍵詞】：嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體 AnkA蛋白 原核表達(dá) 免疫原性 交叉反應(yīng)性
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R392.1
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 英文縮略詞表10-11
• 前言11-12
• 第一篇 綜述 人粒細(xì)胞無(wú)形體病（HumanGranulocyticAnaplasmosis）和嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體（A.phagocytophilum）12-22
• 1 微生物學(xué)，病理學(xué)和致病機(jī)理12-14
• 1.1 分類(lèi)和命名12-13
• 1.2 微生物學(xué)和致病機(jī)理13-14
• 2 生態(tài)學(xué)和流行病學(xué)14-16
• 2.1 生態(tài)學(xué)14-15
• 2.2 流行病學(xué)15-16
• 3 臨床表現(xiàn)和診斷16-18
• 3.1 臨床表現(xiàn)16-17
• 3.2 診斷17-18
• 4 治療18
• 5 AnkA蛋白18-22
• 第二篇 試驗(yàn)研究22-56
• 實(shí)驗(yàn)一 嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體AnkA重組蛋白的克隆表達(dá)和鑒定22-46
• 摘要22
• 1 材料和方法22-35
• 1.1 材料22-24
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法24-35
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-44
• 2.1 蛋白序列分析35-39
• 2.2 ankA目的基因的擴(kuò)增及純化39
• 2.3 pEASY-T（+）-ankA重組質(zhì)粒鑒定39-40
• 2.4 pEASY-T（+）-ankA質(zhì)粒和表達(dá)質(zhì)粒pET30a（+）雙酶切40-41
• 2.5 酶切產(chǎn)物的純化41
• 2.6 ankA目的基因的測(cè)序及對(duì)比結(jié)果41
• 2.7 小量誘導(dǎo)表達(dá)41-42
• 2.8 AnkA重組蛋白的純化42-43
• 2.9 重組蛋白的飛行時(shí)間質(zhì)譜分析結(jié)果43
• 2.10 免疫印跡43-44
• 3 討論44-46
• 3.1 蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)的意義44-45
• 3.2 融合蛋白與包涵體45-46
• 實(shí)驗(yàn)二 三株嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體AnkA蛋白免疫原性差異性研究46-56
• 摘要46
• 1 材料和方法46-51
• 1.1 材料46-47
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法47-51
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果51-55
• 2.1 ELISA預(yù)實(shí)驗(yàn)51
• 2.2 小鼠免疫抗體水平的檢測(cè)結(jié)果--ELISA以及Westernblot反應(yīng)51-52
• 2.3 重組蛋白與立克次體目常見(jiàn)致病菌交叉反應(yīng)—ELISA以及Westernblot反應(yīng)52-53
• 2.4 AnkA重組蛋白交叉免疫分析—ELISA以及Westernblot反應(yīng)53-55
• 3 討論55-56
• 第三篇 試驗(yàn)結(jié)論56-58
• 參考文獻(xiàn)58-66
• 致謝66-68
• 附錄68-70
• 作者簡(jiǎn)介70-71
• 導(dǎo)師評(píng)閱表71

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 蔣榮猛;李興旺;;臨床醫(yī)師應(yīng)提高對(duì)立克次體病的認(rèn)識(shí)[J];傳染病信息;2010年01期

2 程周祥;楊小祥;李群;何建剛;豆正東;吳家兵;喻艷林;王斐;;皖南地區(qū)2006年一起人傳“粒細(xì)胞無(wú)形體病”疫情的流行病學(xué)特征[J];中華疾病控制雜志;2009年01期

3 閆穎;梁茹;;軍團(tuán)菌檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展[J];疾病監(jiān)測(cè)與控制;2013年09期

4 WU XiaoXu;TIAN HuaiYu;ZHOU Sen;CHEN LiFan;XU Bing;;Impact of global change on transmission of human infectious diseases[J];Science China(Earth Sciences);2014年02期

5 趙秋敏,曹務(wù)春,張習(xí)坦,高東旗,張泮河,羅松發(fā),王景春,于長(zhǎng)龍,高玉敏,楊紅;黑龍江全溝硬蜱中檢測(cè)出類(lèi)似人粒細(xì)胞埃利希體的病原體DNA[J];中國(guó)人獸共患病雜志;2001年02期

6 韓紅玉;李榴佳;董輝;朱順海;吳有陵;吳迪;趙其平;姜連連;王艷歌;裴恩樂(lè);黃兵;;上海市部分鳥(niǎo)類(lèi)寄生蠕蟲(chóng)感染情況調(diào)查[J];中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào);2013年06期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 寶福凱;伯氏疏螺旋體的萊姆關(guān)節(jié)炎相關(guān)毒力因子研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 戰(zhàn)曉燕;豬繁殖與呼吸綜合征病毒非結(jié)構(gòu)蛋白Nsp7間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的研制與應(yīng)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

2 李茂峰;不同農(nóng)藝性狀棉花品種（系）纖維初始發(fā)育時(shí)期轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組的比較分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 汪玉嬌;伯氏疏螺旋體重組膜蛋白rBmpA對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞體外作用研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

4 黃林;新疆部分地區(qū)綿羊和鼠類(lèi)無(wú)形體及埃立克體病原調(diào)查及初步分析[D];石河子大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：377178