本文關鍵詞：結核分枝桿菌酯酶的表達、純化、結晶及理化特性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：結核分枝桿菌作為結核傳染病的病原微生物,很早就引起了人們的關注,并對其進行過大量的研究。隨著耐藥結核桿菌突變株的出現(xiàn),結核桿菌對絕大多數常規(guī)治療藥物都出現(xiàn)了不同程度的耐藥性,致使結核病在全球范圍內呈現(xiàn)回升趨勢,我國每年新發(fā)肺結核病人145萬人,結核病已成為我國傳染性疾病中的第一號殺手。通過研究發(fā)現(xiàn),結核分枝桿菌的致病性和耐受性都與其較高的酯類物質含量密切相關。而酯類的代謝主要由酯酶進行調控。所以研究此酯酶的結構和功能有助于更好了解結核分枝桿菌在致病中的作用,并針對性的研發(fā)新一代的結核病治療藥物。本文研究的酯酶基因(Esterase) rv3036c來源于結核分枝桿菌H37Rv,是其酯酶中的一種,。由于結構等相關數據的缺乏,使得對于Rv3036c在結核分枝桿菌酯代謝中的作用與功能尚不清楚。本研究工作主要包括rv3036c基因重組載體構建、Rv3036c蛋白的表達純化、蛋白結晶以及理化特性研究。rv3036c基因重組質粒轉化入大腸桿菌BL21(DE3)中,誘導重組Rv3036c蛋白的大量表達,經過Ni-NTA親和層析、DEAE離子交換層析、Superdex 75凝膠過濾層析等純化技術,得到99%以上純度的目的蛋白,SDS-PAGE電泳結果顯示其分子量為25.5KD。應用分光光度法驗證了其具有酯酶活性。采用氣相擴散懸滴法對Rv3036c的結晶條件進行了篩選與優(yōu)化,最終在一個結晶條件下獲得了適合X-射線衍射的單晶。本研究建立了酯酶表達純化、蛋白結晶及酯酶測定的有效方法,從而為下一步抗結核分枝桿菌藥物設計與開發(fā)提供參考依據,具有重要的理論價值和實際應用前景。
【關鍵詞】：結核分枝桿菌 酯酶 Rv3036c 蛋白質結晶 X射線衍射 理化特性研究
【學位授予單位】：福建農林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R378.911
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 英文縮略語10-11
• 第一章 文獻綜述11-20
• 1.1 結核分枝桿菌11-14
• 1.1.1 生物學性狀11-12
• 1.1.2 致病性12-14
• 1.2 結核病相關疾病的防治與耐藥性現(xiàn)狀的研究14-16
• 1.2.1 結核病防治與現(xiàn)狀14-15
• 1.2.2 結核桿菌耐藥機制的研究15-16
• 1.3 酯酶性質的概述16
• 1.4 酯酶蛋白的功能機制16-19
• 1.5 結核桿菌及其酯酶的研究現(xiàn)狀19
• 1.6 本課題研究的意義與研究內容19-20
• 1.7 論文各部分的主要內容20
• 第二章 結核分枝桿菌酯酶Rv3036c生物信息學分析20-25
• 2.1 引言20-21
• 2.2 方法21-22
• 2.2.1 基本理化性質分析21
• 2.2.2 信號肽預測21
• 2.2.3 跨膜區(qū)預測21
• 2.2.4 同源性分析21-22
• 2.2.5 結構域分析22
• 2.3 Rv3036c生物信息學分析結果22-25
• 2.3.1 Rv3036c基本理化性質分析22-23
• 2.3.2 Rv3036c信號肽預測23
• 2.3.3 Rv3036c跨膜區(qū)預測23
• 2.3.4 Rv3036c同源性分析23-25
• 2.3.5 Rv3036c結構域分析25
• 2.4、結論25
• 第三章 結核分枝桿菌酯酶Rv3036c的表達、純化、結晶25-48
• 3.1、引言25-30
• 3.1.1 基因的克隆與表達26
• 3.1.2 蛋白的分離與純化26-28
• 3.1.3 蛋白的結晶28-30
• 3.2 試驗材料30-31
• 3.3 試驗方法31-41
• 3.3.1 原核表達載體的構建31-37
• 3.3.2 轉化宿主蛋白的表達37-38
• 3.3.3 融合蛋白的純化38-40
• 3.3.4 蛋白結晶40-41
• 3.4 試驗結果41-48
• 3.4.1 Rv3036c重組質粒的構建與鑒定41-42
• 3.4.2 Rv3036c的表達42
• 3.4.3 Rv3036c的純化42-45
• 3.4.4 Rv3036c的蛋白結晶45-48
• 3.5 結論48
• 第四章 結核分枝桿菌酯酶Rv3036c的理化特性分析48-54
• 4.1 引言48-49
• 4.1.1 質譜分析49
• 4.1.2 圓二色譜分析49
• 4.2 試驗材料49
• 4.2.1 試劑和耗材49
• 4.2.2 儀器49
• 4.3 試驗方法49-50
• 4.3.1 質譜分析49-50
• 4.3.2 圓二色譜分析50
• 4.3.3 酯酶活性分析50
• 4.4 試驗結果50-54
• 4.4.1 質譜分析50-51
• 4.4.2 圓二色譜分析51-52
• 4.4.3 酶活性分析52-54
• 4.5 結論54
• 第五章 結論54-56
• 參考文獻56-60
• 致謝60

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