本文關鍵詞：成年豚鼠新皮質淺層神經球培養(yǎng)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的分析成年豚鼠新皮質淺層細胞體外增殖和分化潛能,探討新皮質淺層存在成年神經發(fā)生的可能性。 方法分離不同年齡段豚鼠不同部位腦組織,包括新皮質淺層、深層以及海馬腦組織,體外懸浮培養(yǎng)、擴增及傳代,比較不同年齡、不同部位組織來源的神經球樣細胞簇形成率的差異；用Nestin免疫熒光染色進一步檢測成年豚鼠皮質淺層分離出的細胞是否具有神經干/祖細胞的特性；去除生長因子后,用胎牛血清和NGF誘導成年豚鼠新皮質淺層神經干/祖細胞進行分化,通過免疫熒光染色檢測神經元標記物MAP-2、β-Ⅲ Tubulin和星形膠質細胞標記物GFAP的表達；并應用膜片鉗技術對誘導分化后神經元的電生理功能進行檢測。 結果所取的豚鼠腦組織細胞在體外可以形成集落樣生長的神經球,幾乎整個神經球均由Nestin陽性細胞組成,部分神經球細胞共表達GFAP。誘導分化后的細胞顯示不同比例的神經元標記物MAP-2、β-Ⅲ Tubulin和星形膠質細胞標記物GFAP染色陽性。膜片鉗檢測可見誘導分化后的神經元具有典型的Na+-K+電流及持續(xù)的動作電位。隨著年齡增長,海馬區(qū)克隆形成率逐漸降低,皮質區(qū)克隆形成率并沒有明顯的年齡相關性。 結論原代培養(yǎng)形成的神經球樣細胞簇具有良好的細胞狀態(tài)和增殖能力。豚鼠海馬區(qū)細胞的克隆形成能力有隨著其年齡增長呈現(xiàn)遞減趨勢,而皮質區(qū)克隆形成率卻沒有明顯的年齡相關性。成年豚鼠新皮質淺層細胞能夠體外增殖,并且能夠分化為星形膠質細胞和具有生理功能的神經元,該區(qū)可能為潛在的神經發(fā)生區(qū)。圖9幅,表0個,參考文獻49篇。
【關鍵詞】：神經干/祖細胞 神經球 細胞培養(yǎng) 細胞分化 皮質
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 目錄7-9
• 符號說明9-10
• 1 前言10-11
• 2 材料與方法11-17
• 2.1 實驗動物11
• 2.2 主要試劑及設備11-12
• 2.3 主要試劑配制12-13
• 2.4 實驗方法13-17
• 2.4.1 原代神經干/祖細胞取材及接種13
• 2.4.2 神經干/祖細胞克隆培養(yǎng)13
• 2.4.3 計算克隆培養(yǎng)體系下不同年齡段不同部位的克隆形成率13-14
• 2.4.4 神經干/祖細胞傳代培養(yǎng)14
• 2.4.5 神經干/祖細胞特異性標志物Nestin的免疫熒光細胞化學鑒定14-15
• 2.4.6 貼壁神經球的GFAP和Nestin免疫熒光雙標鑒定15
• 2.4.7 神經干/祖細胞誘導分化及免疫熒光鑒定15-16
• 2.4.8 膜片鉗檢測細胞電生理特性16
• 2.4.9 神經干/祖細胞凍存和復蘇16-17
• 3 結果17-19
• 3.1 神經干/祖細胞原代分離培養(yǎng)結果及鑒定17
• 3.2 神經干/祖細胞傳代培養(yǎng)結果17
• 3.3 神經干/祖細胞誘導分化培養(yǎng)結果及免疫熒光鑒定17-18
• 3.4 神經干/祖細胞誘導分化所得神經元電生理功能檢測18
• 3.5 不同年齡段不同部位神經干/祖細胞克隆增殖潛能比較18-19
• 4 討論19-25
• 4.1 成年哺乳動物神經干細胞與神經發(fā)生19-20
• 4.2 大、中型成年哺乳動物神經球培養(yǎng)的建立與優(yōu)化20-22
• 4.2.1 腦組織分離消化20-21
• 4.2.2 細胞種板與傳代21
• 4.2.3 培養(yǎng)基成分選擇21-22
• 4.2.4 細胞凍存復蘇22
• 4.3 成年豚鼠皮質淺層來源神經球的鑒定22-25
• 5 結論25-26
• 圖片說明26-33
• 參考文獻33-38
• 綜述38-50
• 參考文獻45-50
• 攻讀學位期間的成果50-51
• 致謝51

【共引文獻】

中國期刊全文數據庫 前5條

1 ;Is the neocortex a novel reservoir for adult mammalian neurogenesis?[J];Neural Regeneration Research;2011年17期

2 章顯寶;汪瑛;王震;孔紅兵;汪節(jié);江六順;郭曉利;肖偉;;項叢刺針法對缺血性腦卒中后遺癥大鼠BDNF、NGF以及神經行為學的影響[J];上海針灸雜志;2014年02期

3 Chunling Fan;Mengqi Zhang;Lei Shang;Ngobe Akume Cynthia;Zhi Li;Zhenyu Yang;Dan Chen;Jufang Huang;Kun Xiong;;Short-term environmental enrichment exposure induces proliferation and maturation of doublecortin-positive cells in the prefrontal cortex[J];Neural Regeneration Research;2014年03期

4 樊明超;王巧玲;劉克;張欣;關云謙;孫鵬;;人胚胎紋狀體來源神經干細胞的體外培養(yǎng)(英文)[J];中國組織工程研究;2013年27期

5 祁存芳;張軍峰;陳新林;焦倩;張建水;劉勇;;缺氧對成年大鼠SVZ組織分離培養(yǎng)神經干細胞的影響[J];西安交通大學學報(醫(yī)學版);2013年06期

中國博士學位論文全文數據庫 前5條

1 邱文;SublyticC5b-9誘導GMCs增殖和ECM分泌的機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2009年

2 許智祥;糖原合酶激酶3β在嗅覺系統(tǒng)中功能的研究[D];中國科學院研究生院（武漢物理與數學研究所）;2013年

3 邱e，

本文編號：373413