發(fā)布時(shí)間：2023-01-12 13:05

　　目的： 了解不同濃度胰島素對(duì)擬胚體（embryoid body, EB）神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育相關(guān)基因時(shí)序性表達(dá)的影響。方法： 采用小鼠EB為研究對(duì)象,體外培養(yǎng)模擬胚胎早期發(fā)育,以60pM及6nM胰島素進(jìn)行干預(yù),并分別于培養(yǎng)的第1、3、5、7、9、11天收集EB細(xì)胞；利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)基因Sox2、Fgf5、 Pax6、Arx的時(shí)序性表達(dá)。 結(jié)果： 1.從形態(tài)學(xué)看,60pM組EB狀態(tài)優(yōu)于6nM組；60pM組EB第5天開始出現(xiàn)囊腔化趨勢,第7天形成囊化腔；6nM組EB第7天才開始出現(xiàn)囊腔化趨勢,且在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中一直沒形成囊化腔； 2.6nM胰島素組EB的Sox2、Fgf5、Pax6、Arx的表達(dá)量均明顯高于60pM組EB； 3.Sox2基因表達(dá)在2組EB第5天達(dá)到高峰,第11天同時(shí)降至最低； 4.Fgf5基因在2組EB前5天的表達(dá)量都很低,隨后出現(xiàn)表達(dá)增加,60pM組第7天到達(dá)高峰,6nM組第7天明顯升高,第9天到高峰,至11天2組表達(dá)同時(shí)下降至同一水平； 5.Pax6基因在6nM組中從第3天開始上升,第7天到達(dá)高峰,11天下調(diào)至最低水平,而在60pM組中... 

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要 Abstract 第1章 緒論 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1.1 細(xì)胞系
    2.1.2 耗材
    2.1.3 試劑
    2.1.4 主要儀器
    2.1.5 培養(yǎng)基的配置
2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2.1 小鼠MEF細(xì)胞的培養(yǎng)
    2.2.2 制備飼養(yǎng)層細(xì)胞
    2.2.3 小鼠ES細(xì)胞的復(fù)蘇及培養(yǎng)
    2.2.4 小鼠EB的形成、培養(yǎng)及胰島素干預(yù)
    2.2.5 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測各組EB的基因表達(dá)差異 第3章 結(jié)果
3.1 擬胚體的生長形態(tài)
3.2 RNA電泳圖
3.3 Real-timePCR檢測結(jié)果
    3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及產(chǎn)物溶解曲線
    3.3.2 實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線圖
    3.3.3 各樣品目的基因相對(duì)定量結(jié)果
    3.3.4 各樣品目的基因相對(duì)定量表達(dá)趨勢圖及結(jié)果分析 第4章 討論
4.1 不同濃度胰島素對(duì)Sox2表達(dá)的影響
4.2 不同濃度胰島素對(duì)Fgf5表達(dá)的影響
4.3 不同濃度胰島素對(duì)Pax6表達(dá)的影響
4.4 不同濃度胰島素對(duì)Arx表達(dá)的影響
4.5 DNA甲基化與神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)基因表達(dá)的關(guān)系 第5章 結(jié)論 參考文獻(xiàn) 綜述
參考文獻(xiàn) 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果 致謝


【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]胰島素對(duì)擬胚體多能性和分化相關(guān)標(biāo)志基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化的影響[D]. 朱艷.中南大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3729964