本文關(guān)鍵詞：旋毛蟲(chóng)與肝癌H7402相關(guān)抗原蛋白的單克隆抗體制備及應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：旋毛蟲(chóng)（Trichinella speralis）是一種毛形科毛形屬寄生蟲(chóng)，對(duì)人畜皆有感染能力。根據(jù)現(xiàn)有的研究資料表明，旋毛蟲(chóng)對(duì)部分腫瘤細(xì)胞具有一定的抑制和干擾作用，能夠降低腫瘤細(xì)胞的增殖能力或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。肝癌被認(rèn)定為世界健康一大殺手，發(fā)病率及死亡率居高不下，其危險(xiǎn)性不容小覷。但是，肝癌疫苗及傳統(tǒng)抗肝癌藥物并不能良好的發(fā)揮作用，，因此，探尋高效、低毒、副作用少的生物制劑成為人們對(duì)抗肝癌的迫切需求。現(xiàn)已有研究證明旋毛蟲(chóng)蟲(chóng)體蛋白與肝癌H7402細(xì)胞間存在交叉抗原；本實(shí)驗(yàn)室利用免疫篩選得到的旋毛蟲(chóng)與肝癌H7402相關(guān)的CK-1基因制備了單克隆抗體，其在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中均發(fā)現(xiàn)能夠抑制肝癌H7402細(xì)胞的生長(zhǎng)。由此可見(jiàn)，旋毛蟲(chóng)體內(nèi)可能含有或分泌抗癌物質(zhì)。故而，本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)表達(dá)文庫(kù)篩選法尋找其他旋毛蟲(chóng)與肝癌H7402細(xì)胞之間的相關(guān)抗原，并利用制備的單克隆抗體來(lái)觀測(cè)其抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的效果，從而為日后探索肝癌的生物治療方法和旋毛蟲(chóng)抑制腫瘤的效果提供信息。 本實(shí)驗(yàn)在已建立的旋毛蟲(chóng)cDNA表達(dá)文庫(kù)的基礎(chǔ)上，利用免疫篩選的方法獲得了與肝癌H7402細(xì)胞具有免疫反應(yīng)的6種相關(guān)抗原基因，分別為半胱氨酸線性蛋白（Tsp_06120）、高爾基體聯(lián)合植物相關(guān)致病蛋白（Tsp_07885）、硒蛋白T（Tsp_03801）、DNA剪切修復(fù)蛋白ERCC-1（Tsp_01641）、脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶作用蛋白（Tsp_01476）和核糖氧化還原蛋白（Tsp_04425）。通過(guò)生物學(xué)分析后，后續(xù)試驗(yàn)選擇硒蛋白T基因進(jìn)行原核表達(dá)和純化。在硒蛋白T單克隆抗體的制備中，我們共得到3株單克隆細(xì)胞記為4F1，4H2和4D4。經(jīng)抗體亞類鑒定、核型分析和效價(jià)檢測(cè)后，4H2為IgG2b亞類，染色體數(shù)目104，腹水效價(jià)，大于1×105。隨后，用4H2抗體進(jìn)行了體內(nèi)和體外的腫瘤抑制實(shí)驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在體外MTT實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)單克隆抗體含量為50μg/100μL時(shí)，對(duì)肝癌H7402細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率為26.7%；在動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)單克隆抗體含量為100μg/100μL時(shí)，對(duì)腫瘤的抑制率為80.3%。
【關(guān)鍵詞】：旋毛蟲(chóng) 硒蛋白T 單克隆抗體 體內(nèi)外抑制試驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R735.7;R392
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 英文縮寫(xiě)詞注釋表8-9
• 引言9-10
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述10-16
• 第1章 旋毛蟲(chóng)抗腫瘤的相關(guān)研究進(jìn)展10-13
• 第2章 肝癌治療方法的研究進(jìn)展13-16
• 第二篇 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容16-43
• 第1章 旋毛蟲(chóng)與肝癌 H7402 細(xì)胞相關(guān)抗原基因的篩選和鑒定16-23
• 1.1 材料與方法16-19
• 1.2 結(jié)果19-21
• 1.3 討論21-22
• 1.4 小結(jié)22-23
• 第2章 旋毛蟲(chóng)硒蛋白 T 基因的表達(dá)與純化23-32
• 2.1 材料與方法23-28
• 2.2 結(jié)果28-31
• 2.3 討論31
• 2.4 小結(jié)31-32
• 第3章 旋毛蟲(chóng)硒蛋白 T 單克隆抗體的制備與純化32-38
• 3.1 材料與方法32-35
• 3.2 結(jié)果35-37
• 3.3 討論37
• 3.4 小結(jié)37-38
• 第4章 單克隆抗體抗肝癌 H7402 效果的檢測(cè)38-43
• 4.1 材料與方法38-39
• 4.2 結(jié)果39-40
• 4.3 討論40-41
• 4.4 小結(jié)41-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介50-51
• 作者簡(jiǎn)介及科研成果51-52
• 致謝52

【參考文獻(xiàn)】

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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  本文關(guān)鍵詞：旋毛蟲(chóng)與肝癌H7402相關(guān)抗原蛋白的單克隆抗體制備及應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：367673