發(fā)布時(shí)間：2022-02-26 18:47

　　天然免疫系統(tǒng)是宿主抵抗病原入侵的第一道防線,它對病毒等病原微生物的識別主要依賴宿主的模式識別受體（pattern-recognition receptor, PRR）。病毒核酸被模式識別受體識別后能引發(fā)一系列信號事件誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生。Ⅰ型干擾素在保護(hù)宿主的抗病毒天然免疫反應(yīng)中發(fā)揮著極其重要的作用,同時(shí)也是誘發(fā)自身免疫疾病的元兇。近年來,對于病毒核酸誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究取得了很大進(jìn)展。其中,病毒RNA能被RIG-I樣受體（RIG-I like receptor, RLR）家族成員RIG-I （retinoic acid inducible gene I）和MDA5（melanoma differentiation-associated gene5）識別,它們進(jìn)一步招募下游接頭蛋白VISA （virus-induced signaling adaptor）和MITA （mediator of IRF3activation）激活轉(zhuǎn)錄因子NF-κB （nuclear factor kappa B）和IRF3/IRF7（interferon regulatory factor3/7... 

【文章來源】：武漢大學(xué)湖北省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：184 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 研究背景
    1.1 病毒誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素表達(dá)的調(diào)控機(jī)制
        1.1.1 天然免疫概述
        1.1.2 宿主細(xì)胞對病毒的識別及Ⅰ型干擾素的誘導(dǎo)
        1.1.3 MITA在抗病毒天然免疫反應(yīng)中的作用
        1.1.4 MITA和它的翻譯后修飾
        1.1.5 RNF26概述
    1.2 細(xì)胞抗病毒天然免疫與亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)
        1.2.1 過氧化物酶體與抗病毒天然免疫信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
        1.2.2 過氧化物酶體的純化
        1.2.3 蛋白質(zhì)組學(xué)相對定量
2 RNF26調(diào)控病毒誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素產(chǎn)生的分子機(jī)制
    2.1 立項(xiàng)依據(jù)
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 細(xì)胞和刺激物
        2.2.2 載體及構(gòu)建載體相關(guān)材料
        2.2.3 構(gòu)建逆轉(zhuǎn)錄病毒細(xì)胞系相關(guān)材料
        2.2.4 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)和免疫印跡實(shí)驗(yàn)相關(guān)材料
        2.2.5 體外泛素化實(shí)驗(yàn)相關(guān)材料
        2.2.6 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)相關(guān)材料
        2.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR相關(guān)材料
        2.2.8 激光共聚焦顯微鏡觀察熒光實(shí)驗(yàn)相關(guān)材料
        2.2.9 亞細(xì)胞組分分離實(shí)驗(yàn)相關(guān)材料
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
        2.3.3 構(gòu)建載體和提取質(zhì)粒
        2.3.4 構(gòu)建細(xì)胞系
        2.3.5 制備多克隆抗體和免疫前血清
        2.3.6 免疫共沉淀和免疫印跡實(shí)驗(yàn)
        2.3.7 泛素化實(shí)驗(yàn)
        2.3.8 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        2.3.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)
        2.3.10 激光共聚焦顯微鏡觀察熒光實(shí)驗(yàn)
        2.3.11 亞細(xì)胞器組分分離
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 RNF26是MITA的E3泛素連接酶
        2.4.2 RNF26與MITA相互作用
        2.4.3 RNF26靶向MITA的K150位點(diǎn)發(fā)生多聚泛素化修飾
        2.4.4 RNF26催化MITA發(fā)生K11連接的多聚泛素化修飾
        2.4.5 RNF26防止MITA發(fā)生K48連接的多聚泛素化修飾和降解
        2.4.6 RNF26調(diào)節(jié)病毒誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素產(chǎn)生
        2.4.7 RNF26影響IRF3蛋白的穩(wěn)定性
    2.5 小結(jié)與討論
        2.5.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果小結(jié)
        2.5.2 討論
3 過氧化物酶體相關(guān)抗病毒天然免疫蛋白的篩選
    3.1 立項(xiàng)依據(jù)
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 細(xì)胞和刺激物
        3.2.2 亞細(xì)胞組分分離實(shí)驗(yàn)相關(guān)材料
        3.2.3 蛋白質(zhì)定量、脫鹽、雙甲基化標(biāo)記和質(zhì)譜鑒定相關(guān)材料
        3.2.4 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)相關(guān)材料
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染、雙熒光報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)和免疫印跡實(shí)驗(yàn)
        3.3.2 差速離心法從培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞中分離輕線粒體組分
        3.3.3 連續(xù)密度梯度超速離心法從輕線粒體組分中分離過氧化物酶體
        3.3.4 定量蛋白質(zhì)組樣品制備
        3.3.5 雙甲基化標(biāo)記
        3.3.6 SCX色譜分離
        3.3.7 質(zhì)譜分析與數(shù)據(jù)處理
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 過氧化物酶體的富集
        3.4.2 質(zhì)譜鑒定結(jié)果和兩次結(jié)果的相關(guān)性分析
        3.4.3 鑒定蛋白的分組
        3.4.4 候選蛋白的初步功能鑒定
        3.4.5 部分候選蛋白的后續(xù)功能鑒定
    3.5 小結(jié)與討論
        3.5.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果小結(jié)
        3.5.2 討論
4 論文創(chuàng)新點(diǎn)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
攻博期間發(fā)表的科研成果目錄
致謝



本文編號：3644924