類轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)物核酸酶（Transcription activator-like effector nuclease, TALEN）是人工構(gòu)建的序列特異性核酸內(nèi)切酶的一種,它能夠識別并切割特定的DNA靶序列,造成雙鏈斷裂,并引起基因組結(jié)構(gòu)的定點(diǎn)改變。它2010年底成功應(yīng)用于基因打靶,很快成為一種比鋅指核酸酶（Zinc-finger nuclease, ZFN）更容易設(shè)計(jì)、特異性更高和毒性更低的人工核酸內(nèi)切酶。本文將用舉例的方法從TALEN的設(shè)計(jì)、構(gòu)建及六種活性或突變效率檢測方法來建立并完善TALEN平臺,并從方法的難易程度及優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行評估六種突變率檢測方法和合適的應(yīng)用范圍。通過UA （Unit Assembly,單元組裝）和Golden Gate Vector based Assembly方法合成TALEN質(zhì)粒,并比較酶切,SSA檢測系統(tǒng),T7E1酶切加毛細(xì)血管電泳檢測,加藥T在檢測以及單克隆檢測等方法,比較構(gòu)建及篩選的優(yōu)缺點(diǎn)。我們成功構(gòu)建了TANLEN質(zhì)粒,并建立了較多的檢測TALEN切割效果的方法,比較了各種方法的優(yōu)缺點(diǎn),找到合適的評估體系。我們推薦T7E1酶切試驗(yàn)作為早期篩選... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
第一部分 基因編輯技術(shù)TALEN的構(gòu)建及其突變篩選體系的優(yōu)化和比較
    摘要
    Abstract
    前言
    方法與步驟
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 利用基因編輯技術(shù)TALEN建立K562細(xì)胞系FLT3/ITD敲入模型
    摘要
    Abstract
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 利用基因編輯技術(shù)TALEN建立K562細(xì)胞系中半敲除FLT3基因模型及其相關(guān)效應(yīng)研究
    摘要
    Abstract
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第四部分 綜述 FLT3/ITD突變在急性髓系白血病中的作用
    參考文獻(xiàn)
中英文縮略表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]類轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)物核酸酶（TALEN）介導(dǎo)的基因組定點(diǎn)修飾技術(shù)[J]. 沈延,肖安,黃鵬,王唯曄,朱作言,張博.  遺傳. 2013(04)



本文編號：3605100