發(fā)布時間：2017-05-11 11:08

  本文關鍵詞：小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向胰島素分泌細胞誘導分化過程中調(diào)控PDX1基因表達的miRNAs的鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 實現(xiàn)小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（bone marrow mesenchymal stemcells，bMSCs）向胰島素分泌細胞（insulin-producing cells，，IPCs）的誘導分化并對分化過程中可能調(diào)控胰十二指腸同源異型框基因1（Pancreatic and duodenal homeobox gene1，PDX1）表達的miRNAs進行鑒定。 方法 首先，分離培養(yǎng)bMSCs，應用conophylline和尼克酰胺將其誘導分化為IPCs，采用雙硫腙（DTZ）染色和免疫熒光檢測胰島素的表達。然后，采用靶基因預測軟件miRanda和TargetScan對調(diào)控PDX1基因表達的miRNAs進行預測并通過雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)鑒定。 qRT-PCR檢測誘導分化過程中miRNAs及PDX1的表達。 結果 BMSCs傳至3~4代，細胞均勻分布，形態(tài)規(guī)則均一，呈長梭形，折光性強。誘導分化后的細胞變成圓形、橢圓形，并且成團懸起；DTZ染色呈猩紅色，提示細胞中有鋅離子，參與胰島素的合成；細胞免疫熒光顯示分化2w后的細胞內(nèi)有胰島素表達，顯示綠色熒光。生物信息學方法預測得到miR-149、 miR-346、 miR-133a和miR-133b共4個可能調(diào)控PDX1表達的miRNAs，通過雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測發(fā)現(xiàn)其中的miR-149和miR-346能結合到PDX1mRNA的3'UTR并有效抑制其表達。qRT-PCR檢測結果表明，miR-149和miR-346的表達水平與PDX1表達呈負相關。 結論 miR-149和miR-346能負性調(diào)控IPCs誘導分化過程中PDX1的表達。
【關鍵詞】：微小RNA 胰十二指腸同源異型框基因1 胰島素分泌細胞 小鼠
【學位授予單位】：遼寧醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329
【目錄】：

• 中文論著摘要4-6
• 英文論著摘要6-8
• 英文縮略語表8-9
• 前言9-10
• 實驗材料與方法10-16
• 實驗結果16-25
• 討論25-28
• 結論28-29
• 本研究創(chuàng)新性的自我評價29-30
• 參考文獻30-33
• 綜述33-41
• 參考文獻37-41
• 在學期間科研成績41-42
• 致謝42-43
• 個人簡介43-44

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Expression of Pdx-1 in bone marrow mesenchymal stem cells promotes differentiation of islet-like cells in vitro[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2006年05期

  本文關鍵詞：小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向胰島素分泌細胞誘導分化過程中調(diào)控PDX1基因表達的miRNAs的鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：357105