發(fā)布時間：2022-01-02 05:51

　　目的 神經(jīng)干細(xì)胞具有增殖和分化能力，為神經(jīng)系統(tǒng)損傷和退行性病變的治療帶來了希望，其目前的關(guān)鍵問題是神經(jīng)干細(xì)胞定向分化的誘導(dǎo)。本研究旨在體外誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞定向分化為膽堿能神經(jīng)元；探討神經(jīng)干細(xì)胞定向分化過程中突起生長機制。 本研究分3步進行。第一，分離、培養(yǎng)新生大鼠脊髓神經(jīng)干細(xì)胞，加入NGF、IGF-1、胰島素，觀察此誘導(dǎo)因素是否使新生鼠脊髓神經(jīng)干細(xì)胞定向分化為膽堿能神經(jīng)元。 第二，探討細(xì)胞骨架蛋白-β-微管蛋白（β-tubulin）在脊髓神經(jīng)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元過程中的表達及意義。神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育過程中，細(xì)胞生長、遷移、軸突和樹突的發(fā)出，把大分子物質(zhì)和細(xì)胞器運送到其突起的分支以及軸突與其他神經(jīng)細(xì)胞建立突觸聯(lián)系等，均與細(xì)胞骨架有關(guān)。我們已知，神經(jīng)元中最豐富的骨架蛋白是β微管蛋白（β-tubulin）。因此，β-tubulin表達的時空變化，可為神經(jīng)干細(xì)胞的定向分化研究提供重要依據(jù)。文獻報道β-catenin可能與神經(jīng)元軸突的早期生長有關(guān)。因此，結(jié)合β-catenin能更好地揭示神經(jīng)元發(fā)育過程中的突起生長機制。 第三，跟蹤觀察突起生長錐中高表達的GAP-43在神經(jīng)干細(xì)胞定向... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

新生大鼠脊髓神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)神經(jīng)球形成及其Nestin鑒定:A:神經(jīng)干細(xì)胞增殖成神經(jīng)球(40()x)

圖2Nes6n分化第一日的神經(jīng)千細(xì)胞N.眨n陽性反應(yīng)。A:神經(jīng)球最邊緣的細(xì)胞呈梭形，反應(yīng)弱陽性(400x)B:體積較大的畫形細(xì)胞N“tin陽性反應(yīng)(悶加x)。圖3脊位神經(jīng)干細(xì)飽N.石n布于細(xì)胞質(zhì)中(N為細(xì)胞核，免疫電鏡結(jié)果。5以刃K)。3A2:3AI:電于毯度離的N.眨n反應(yīng)機泥物分一部分核膜出現(xiàn)鋸齒狀改變(lOKx)。3B:分化第1日后，核膜似絨毛狀(15Kx)。。21.

電鏡觀察:可見電子密度高的Nestin陽性沉淀物分布于細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞體積小，核大，細(xì)胞質(zhì)少(圖3AI)，一部分核膜出現(xiàn)短小的鋸齒狀改變(圖3A2);24k后，核旗的改變明顯，核膜邊界不清，有內(nèi)凹部分，也有細(xì)小隆起，似絨毛狀，細(xì)胞質(zhì)增多，細(xì)胞開始伸出突起(圖3B)了3.脊髓神經(jīng)干細(xì)胞的定向分化結(jié)果加人含血清的培養(yǎng)基后，實驗組和對照組細(xì)胞都迅速貼壁，開始長出突起。實驗組細(xì)胞于剛貼壁的24小時內(nèi)有細(xì)胞增殖現(xiàn)象，故�？捎^察到成堆的細(xì)胞，但兩者細(xì)胞形態(tài)無明顯差別。進行NSE免疫染色后，實驗組可見較多的NSE陽性細(xì)胞

【參考文獻】：
期刊論文
[1]細(xì)胞因子對神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化的影響[J]. 張文治,蘇心,秦進喜,孔繁明,孔建國,王新平,只達石.  臨床與實驗病理學(xué)雜志. 2003(01)
[2]神經(jīng)生長因子受體TrkA在新生鼠、幼鼠及成鼠脊髓表達差異的研究[J]. 王永忠,張志堅,劉錦波,姜平,查小英.  神經(jīng)解剖學(xué)雜志. 2002(04)
[3]神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定[J]. 呂海俠,劉勇,李敏杰,丁海燕.  西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2002(05)
[4]整合素和細(xì)胞骨架在細(xì)胞力傳導(dǎo)中的作用[J]. 楊芬,李瑩輝.  航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程. 2002(04)
[5]Wnt與其他信號通路在胚胎發(fā)育過程中的crosstalk[J]. 白戈,唐珂,景乃禾.  生命的化學(xué). 2002(04)
[6]IL-1β和胎牛血清對大鼠神經(jīng)干細(xì)胞分化的影響[J]. 劉仕勇,張可成,楊輝,呂勝青.  中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志. 2000(04)
[7]心肌細(xì)胞骨架系統(tǒng)——微管的研究進展[J]. 徐峰,柏樹令.  解剖科學(xué)進展. 2000(04)
[8]脊髓神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定[J]. 孟晉宏,Udo Bartsch,Melitta Schachner,鞠躬.  第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2000(08)



本文編號：3563606