目的構(gòu)建人去整合素-金屬蛋白酶17（ADAM17）啟動子的熒光素酶報告質(zhì)粒,對不同位點進行定點突變,分析其轉(zhuǎn)錄活性。方法通過生物信息學分析ADAM17啟動子區(qū)域的叉頭轉(zhuǎn)錄因子M1（FoxM1）結(jié)合位點,以人胃癌細胞系MGC-803基因組為模板,PCR擴增ADAM17基因啟動子-1 365～+51片段,連接到熒光素酶報告基因載體pGL3-basic中;對FoxM1結(jié)合的3個位點進行定點突變;轉(zhuǎn)染至293T細胞后用雙熒光素酶報告系統(tǒng)分析其轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果測序結(jié)果顯示,ADAM17啟動子熒光素酶報告基因及其突變體均構(gòu)建成功;與pGL3-basic組相比,pGL3-ADAM17（-1 365～+51）組介導的熒光素酶活性明顯升高（P<0.05）;與對照組相比,過表達FoxM1組介導的熒光素酶活性明顯升高（P<0.05）,且pGL3-ADAM17（-1 365～+51）組高于突變組（P<0.05）。結(jié)論成功構(gòu)建了人ADAM17啟動子熒光素酶報告基因及其突變體,初步驗證了ADAM17受轉(zhuǎn)錄因子FoxM1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。 

【文章來源】：基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床. 2019,39(09)CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

FoxM1結(jié)合及突變位點Fig2FoxM1bindingandmutationsites

基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床Basic＆ClinicalMedicine2019.39(9)圖2FoxM1結(jié)合及突變位點Fig2FoxM1bindingandmutationsites圖3pGL3-ADAM17(－1365～+51)突變質(zhì)粒測序部分結(jié)果Fig3SectionalsequencingresultofmutantpGL3-ADAM17(－1365－－+51)置3flagvector為對照組，雙熒光素酶報告系統(tǒng)結(jié)果顯示，實驗組熒光素酶活性均高于對照組，分別為16.925±0.011、4.925±0.024，14.251±0.052、4.846±0.055，10.183±0.023、3.162±0.027，8.219±0.018、2.416±0.015，且pGL3-ADAM17(－1365～+51)組活性高于突變組(圖4)(P＜0.05)。3討論去整合素-金屬蛋白酶(adisintegrinandmetallo-proteinase，ADAMs)是一類鋅依賴性跨膜糖蛋白，參與了機體的多種生物學過程［9］。ADAM17在人類多種腫瘤中異常高表達［2-4］。它的去整合素區(qū)可與整合素相互作用，影響細胞黏附和遷移;金屬蛋白酶區(qū)可水解細胞外基質(zhì)中大部分蛋白，為腫瘤轉(zhuǎn)移掃除障礙;ADAM17還可以水解多種配體和受體，激活EGFＲ，作用于PI3K/AKT和Ｒas/Ｒaf/MAPK等多種*P＜0.05comparedwith3flagvectorgroup;#P＜0.05comparedwithpGL3-ADAM17(－1365～+51)group圖4FoxM1對不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細胞后相對熒光素酶活性的影響Fig4EffectofFoxM1ondoubleluciferaseactivityofdifferentplasmids8031

基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床Basic＆ClinicalMedicine2019.39(9)圖2FoxM1結(jié)合及突變位點Fig2FoxM1bindingandmutationsites圖3pGL3-ADAM17(－1365～+51)突變質(zhì)粒測序部分結(jié)果Fig3SectionalsequencingresultofmutantpGL3-ADAM17(－1365－－+51)置3flagvector為對照組，雙熒光素酶報告系統(tǒng)結(jié)果顯示，實驗組熒光素酶活性均高于對照組，分別為16.925±0.011、4.925±0.024，14.251±0.052、4.846±0.055，10.183±0.023、3.162±0.027，8.219±0.018、2.416±0.015，且pGL3-ADAM17(－1365～+51)組活性高于突變組(圖4)(P＜0.05)。3討論去整合素-金屬蛋白酶(adisintegrinandmetallo-proteinase，ADAMs)是一類鋅依賴性跨膜糖蛋白，參與了機體的多種生物學過程［9］。ADAM17在人類多種腫瘤中異常高表達［2-4］。它的去整合素區(qū)可與整合素相互作用，影響細胞黏附和遷移;金屬蛋白酶區(qū)可水解細胞外基質(zhì)中大部分蛋白，為腫瘤轉(zhuǎn)移掃除障礙;ADAM17還可以水解多種配體和受體，激活EGFＲ，作用于PI3K/AKT和Ｒas/Ｒaf/MAPK等多種*P＜0.05comparedwith3flagvectorgroup;#P＜0.05comparedwithpGL3-ADAM17(－1365～+51)group圖4FoxM1對不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細胞后相對熒光素酶活性的影響Fig4EffectofFoxM1ondoubleluciferaseactivityofdifferentplasmids8031

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3546694