發(fā)布時間：2021-12-12 09:45

　　目的： 伴隨卵母細胞生長的是核糖體和mRNAs轉(zhuǎn)錄活化，小鼠大約在排卵前6天，卵母細胞生長和分化結束而達到成熟，此時卵母細胞中合成和積累了多種RNA、蛋白質(zhì)和細胞器，這些構成了早期胚胎發(fā)育的母源物質(zhì)。胚胎發(fā)育從受精開始，新受精卵中就存儲大量的母源物質(zhì)，隨著胚胎進一步發(fā)育，母源mRNAs逐漸消耗，必然需要合子基因組的適時表達并完全取代之，以實現(xiàn)由母型向合子型調(diào)控過渡，缺乏合子基因組激活的動物胚胎無法進一步發(fā)育。已有研究表明，小鼠合子基因組激活發(fā)生于1-細胞晚期，從未受精卵到單細胞胚胎是母源物質(zhì)控制，由母源物質(zhì)支持并指導了早期胚胎發(fā)育直到合子基因組激活。因此，母源物質(zhì)對早期胚胎發(fā)育的作用日益受到重視，但對早期胚胎發(fā)育或?qū)β涯讣毎蚝献舆^渡有影響的作用的母源基因極少被克隆或識別。所以，我們以生發(fā)泡完整卵母細胞（GV卵）為檢測子，8-細胞胚胎為驅(qū)趕子，應用抑制消減雜交技術建立GV卵中母源基因的消減cDNA文庫，從中獲取小鼠母源基因，為進一步研究母源基因在卵母細胞的發(fā)育成熟、早期胚胎發(fā)育和合子基因組激活中的作用奠定基礎。 方法：第四軍醫(yī)大學博士學位論文 1、應用抑制消減雜交技術... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

SSH的第2輪PCR擴增

.4RT-PCR結果:結果顯示表2中3個基因在GV卵中有表達，而在8一細胞胚胎中不表達(圖3)。表2所選取3個克隆的對應同源基因和引物序列序號同源基因引物序列預計擴增長度6Peroxiredoxinll巧T淋巴細胞瘤斷裂點l25妊娠17天羊膜cDNA克隆F:5’一TI一l’一ICI’ACCCACTGGACTTCAC一3’617R:5’一GGTGGGI’AATGAGAAAGCI丁CA一3F:5’一CGTGAGGAAGAAGGCAAGT-3’296R:5’一TCTGrTTCGCI’AGTCATGTCCTI’-3’F:5’一AACTGCArGTGACACATTGCC一3’391R:5’一TCC‘l一l一l’GGTGAI，GAACAGCA一3’

的作用奠定基礎。結果發(fā)現(xiàn)Clone6基因在GV卵、Mll卵、1一細胞胚胎和2一細胞胚胎有表達，而在4一細胞胚胎、8一細胞胚胎、�？芭咛ズ湍遗呶匆姳磉_(圖4)。Clone25基因同樣在GV卵、Mll卵、1一細胞胚胎和2一細胞胚胎有表達，而在4一細胞胚胎、8一細胞胚胎、�？芭咛ズ湍遗呶匆姳磉_，可是在GV卵、Mll卵、1一細胞胚胎和2一細胞胚胎中出現(xiàn)兩條電泳帶，短片段為391bp，與我們預期要擴增的片段長度一致，該片段在GV卵高表達，從Mll卵開始表達下降;長片段為62lbp，其在GV卵、Mll卵、1一細胞胚胎和2一細胞胚胎中的表達未見明顯變化

【參考文獻】：
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本文編號：3536448