發(fā)布時(shí)間：2021-11-22 09:45

　　人線粒體DNA（mtDNA）是存在于線粒體內(nèi)的雙鏈環(huán)狀DNA分子，長(zhǎng)16，569bp，基因編碼產(chǎn)物包括2種rRNA、22種tRNA及13種多肽鏈。其中多肽鏈?zhǔn)茄趸姿峄笍?fù)合體的重要組成成分，而rRNA和tRNA則參與這些多肽鏈的合成。因此，mtDNA上任何基因的突變，都可能影響氧化磷酸化的功能。1988年，人類首次發(fā)現(xiàn)mtDNA點(diǎn)突變與臨床疾病有關(guān)，截止目前，在mtDNA上發(fā)現(xiàn)的病理性突變已達(dá)50種以上，其中大部分為點(diǎn)突變。近年來(lái)，隨著遺傳科學(xué)的發(fā)展，又發(fā)現(xiàn)mtDNA點(diǎn)突變與人類衰老與某些癌癥的發(fā)生有關(guān)。因而，研究mtDNA突變的產(chǎn)生以及突變的致病機(jī)制，對(duì)維護(hù)人類健康具有重要意義。 mtDNA突變的種類很多，由此產(chǎn)生的疾病癥狀也復(fù)雜多樣。這些特點(diǎn)在線粒體 tRNA^Leu（UUR）基因（MTTL1）部位表現(xiàn)得十分明顯。目前己發(fā)現(xiàn)的MTTL1基因的點(diǎn)突變種類有21種，突變與疾病之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系復(fù)雜，既可能一種突變產(chǎn)生多種疾病，也有可能多種突變產(chǎn)生相同的疾病癥狀。如3243，3252，3271，和3291位點(diǎn)的突變均可導(dǎo)致線粒體腦肌病伴乳酸酸中毒及中風(fēng)樣發(fā)作綜合癥... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

MTT細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)分組用藥及結(jié)果

Contro!12345678圖3Southernblot檢測(cè)mtDNA氧化損傷Fig3SouthernblotanalysisofmtDNAoxidativedamageControl:CellexPosedtoHBSS+l%eitratebufferforl，2:CellsexPosedtoAlloxanforlh:3，4:CellsexPosedtoAlloxanforlhthenallowedtore5，6:CellsexPosedtoAlloxanforlhthenallowedtore7，8:CellsexPosedtoAlloxanforIhthenallowedtore2.3LM一PCR‘LM一PCR擴(kuò)增EndofH和FgP酶切的人刃7藝I片段，經(jīng)測(cè)序膠電泳和熒光掃描，可確定受損核昔熒光掃描結(jié)果見(jiàn)圖4，結(jié)果顯示，四氧嗜咤處理lh對(duì)照組相比，材了了藝I基因區(qū)域內(nèi)核昔酸受損大幅量受損頻率的指標(biāo)，四種核營(yíng)酸受損頻率占基因%，T:31%，C:21%，12%，照相區(qū)

冰浴超聲后離心以粗提細(xì)胞總蛋白，粗提液與3mlNiZ氣NTA瓊脂糖凝膠混合用于親和層析。從1L細(xì)菌培養(yǎng)物中可得到約lmg的純化蛋白，凝膠掃描顯示蛋白純度在95%以上(圖4)。234堿116.0著66·2麗扮幸癲57.5圖4人mtLeLIRS純化過(guò)程聚丙烯酞胺凝膠電泳分析Fig4SDS一PAGEofsamPlesatdifferentstePsinthePurifieationofhumanmitochondrialIeucyl一tRNAsynthetaseThesamPleswereanalyzedonans%SDS一PAGEgelandtheProteinbandswerevisualizedbystainingwithCoomassieblue.l:E.eoliB121一CodonPlus(DE3)一RIL[PET一24a(+)一mtLeuRS]Proteinswithindueedwith0.smmol/LIPTG:2:B121一CodonPlus(DE3)一RIL[PET一24a(+)一mtLeuRSIProteinswithoutinducer:3:PurifiedhumanmitochondrialLeuRS一His6fromNi一NTAagarose;4:Proteinstandardmarkers2.3人線粒體亮氨酞一tRNA(tRNALeu(UUR))的制備以化學(xué)合成的人對(duì)了TLI基因序列為模板，用設(shè)計(jì)的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到含材丁了藝I基因的losbp的DNA片段，在t胭A基因上游為啟動(dòng)子

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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