本文關(guān)鍵詞：干擾素α-2b蛋白的制備與純化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：干擾素（IFNs）是宿主細胞在受到病原體例如病毒、微生物、寄生蟲、腫瘤細胞的侵染后產(chǎn)生并釋放的。干擾素屬于糖蛋白的一種，具有干擾病毒在宿主體內(nèi)復(fù)制的能力，它對于提高宿主免疫系統(tǒng)對病毒的識別和抵抗起到十分重要的作用，現(xiàn)在被廣泛的運用在病毒引起的疾病和腫瘤的治療中。本實驗中的研究對象是干擾素α-2b，它屬于干擾素α，同樣具有抗病毒、抗腫瘤等作用。現(xiàn)代已經(jīng)廣泛的應(yīng)用于腫瘤和癌癥的治療中。但是天然態(tài)的干擾素α-2b產(chǎn)量稀少，這樣就使得需要這種藥物治療的病人承受巨大的經(jīng)濟負擔(dān)，那么提高干擾素蛋白的產(chǎn)量就是擺在現(xiàn)在科研人員面前的一道難題。 運用重組DNA技術(shù)，人們已經(jīng)可以用E coli表達系統(tǒng)高效表達干擾素α-2b基因，干擾素α-2b蛋白以包涵體的形式存在，這樣就需要將包涵體蛋白變性、復(fù)性來得到具有生物活性的干擾素α-2b，然而這一步中極易形成聚集體和錯誤折疊，這個問題已經(jīng)是影響干擾素大量生產(chǎn)的瓶頸問題。 本文通過以下途徑來討論解決提高干擾素蛋白產(chǎn)量的問題：1.脫氧膽酸鈉促進了包涵體蛋白提取，使得產(chǎn)量提高了近25%；2.優(yōu)化變性、復(fù)性的條件以及方法使雜質(zhì)蛋白和二聚體的量顯著減少；3.對離子交換層析條件、方法的優(yōu)化使得一步離子交換就可以分離出二聚體和單體干擾素α-2b，提高了分離的效率簡化了分離步驟。通過對以上方法的綜合改良使得1L的復(fù)性液可以得到145-160mg正確折疊的干擾素2b蛋白。
【關(guān)鍵詞】：干擾素 E coli 包涵體 蛋白質(zhì)復(fù)性 蛋白質(zhì)柱上純化
【學(xué)位授予單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R3411
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 第一章 文獻綜述7-23
• 1.1 干擾素的發(fā)現(xiàn)7
• 1.2 干擾素的產(chǎn)生及機理7-9
• 1.2.1 干擾素的產(chǎn)生7-8
• 1.2.2 干擾素的作用機理8-9
• 1.3 干擾素的分類9-10
• 1.4 干擾素的功能10-12
• 1.5 包涵體中提取干擾素α-2b12-21
• 1.5.1 包涵體產(chǎn)生及結(jié)構(gòu)特點12-13
• 1.5.2 干擾素-α2b 包涵體蛋白的變性以及復(fù)性13-19
• 1.5.3 干擾素α-2b 蛋白的柱上純化19-21
• 1.6 總結(jié)21-23
• 第二章 干擾素-α2b 蛋白的表達23-32
• 2.1 啟動子和誘導(dǎo)調(diào)控表達系統(tǒng)23-25
• 2.1.1 本部分實驗所用試劑24
• 2.1.2 本實驗所用儀器24-25
• 2.1.3 操作步驟25
• 2.2 干擾素α-2b 包涵體的收集25-27
• 2.2.1 菌體的破碎與包涵體的洗滌25-27
• 2.3 SDS-PAGE27-32
• 2.3.1 本部分實驗所需材料及試劑配制27-28
• 2.3.2 灌制分離膠和濃縮膠28-29
• 2.3.3 電泳29
• 2.3.4 染色與脫色29-30
• 2.3.5 數(shù)據(jù)分析30-32
• 第三章 包涵體蛋白變性與復(fù)性條件的改良32-44
• 3.1 干擾素α-2b 包涵體蛋白的變性條件改良32-36
• 3.1.1 本部分實驗所用試劑32
• 3.1.2 實驗步驟32-33
• 3.1.3 數(shù)據(jù)分析33-36
• 3.2 干擾素α-2b 包涵體蛋白的復(fù)性條件改良36-43
• 3.2.1 本部分實驗所用試劑36-37
• 3.2.2 實驗方法37
• 3.2.3 數(shù)據(jù)分析37
• 3.2.4 降低在復(fù)性過程中干擾素 -2b 蛋白質(zhì)之間的相互作用37-39
• 3.2.5 干擾素 -2b 蛋白復(fù)性方法的改良39-43
• 3.3 蛋白濃度的測定43-44
• 3.3.1 蛋白質(zhì)濃度測定操作步驟43-44
• 第四章 干擾素α-2b 蛋白的柱上純化44-55
• 4.1 干擾素α-2b 蛋白的陽離子柱純化44-47
• 4.1.1 本部分實驗所用試劑耗材與儀器44
• 4.1.2 實驗步驟44-45
• 4.1.3 數(shù)據(jù)分析45-47
• 4.2 干擾素 2b 疏水相互作用層析47-50
• 4.2.1 本部分實驗所用材料試劑及主要儀器47
• 4.2.2 實驗步驟47-48
• 4.2.3 數(shù)據(jù)分析48-50
• 4.3 Native 凝膠電泳50-51
• 4.3.1 本部分實驗所需試劑配方50
• 4.3.2 實驗步驟50-51
• 4.3.3 數(shù)據(jù)分析51
• 4.4 羥基磷灰石層析51-55
• 4.4.1 材料試劑51-52
• 4.4.2 主要儀器52
• 4.4.3 實驗步驟52
• 4.4.4 實驗結(jié)果52-55
• 第五章 總結(jié)55-56
• 參考文獻56-60
• 發(fā)表論文和參與科研情況說明60-61
• 致謝61

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 車婧,韓金祥,王世立;促進包涵體蛋白復(fù)性的幾種有效添加劑[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2004年02期

  本文關(guān)鍵詞：干擾素α-2b蛋白的制備與純化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：350157