HCV NS3基因轉(zhuǎn)化人肝細(xì)胞及其機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間:2021-11-14 17:43
丙型肝炎病毒(HCV)感染是目前影響人類健康的嚴(yán)重問(wèn)題,它的持續(xù)感染可引起慢性肝炎、肝硬化和肝細(xì)胞癌(HCC)的發(fā)生,但對(duì)于HCV 持續(xù)感染導(dǎo)致慢性肝疾病的機(jī)理還不清楚。HCV 是一種RNA 病毒,無(wú)逆轉(zhuǎn)錄酶活性,只在細(xì)胞胞漿內(nèi)復(fù)制,不能與宿主基因整合,主要是通過(guò)其表達(dá)的蛋白質(zhì)起作用。盡管對(duì)于HCV 是否直接參與肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化這一問(wèn)題尚不清楚,但已有研究顯示HCV 的結(jié)構(gòu)蛋白C 和非結(jié)構(gòu)蛋白NS3、NS4B、NS5A 具有致癌作用。其中HCV NS3 蛋白(核苷酸34205312,含631 個(gè)氨基酸殘基)是一個(gè)多功能的蛋白質(zhì),其N(xiāo) 端1/3 具有絲氨酸蛋白酶活性,C 端2/3 則表現(xiàn)為解旋酶和NTP 酶活性,HCV NS3 介導(dǎo)的蛋白酶解過(guò)程是病毒在體內(nèi)復(fù)制所必需。因HCV NS3 在病毒生活周期中起重要作用,并可和宿主蛋白相互作用,故其在HCV 相關(guān)性HCC 中的作用已成為研究的熱點(diǎn)之一。HCV 為嗜肝細(xì)胞病毒,其自然宿主細(xì)胞是人或黑猩猩的肝細(xì)胞,采用非肝細(xì)胞作為研究體系,不能真實(shí)反映HCV 感染的自然進(jìn)程,而以往的大部分研究均未采用肝細(xì)胞。因此本研究首次選用人...
【文章來(lái)源】:中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】:112 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【部分圖文】:
轉(zhuǎn)染后經(jīng)G418篩選2周獲得的陽(yáng)性克隆,
測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞基因組 DNA 產(chǎn)物 M: 100bp 分子HCNS3/QSG 細(xì)胞,2: pRcCMV/QSG 細(xì)胞,32 3 4 5 6 estern Blot 檢測(cè) HCV NS3 蛋白的表達(dá)S3/QSG 轉(zhuǎn)染細(xì)胞獲得的 7 個(gè)克隆,8、9 分別SG7701 細(xì)胞,上圖顯示 NS3 蛋白的表達(dá),而
疫細(xì)圖 4. Western Blot 檢測(cè) HCV NS3 蛋白的表達(dá),1~7 分別代表pRcHCNS3/QSG 轉(zhuǎn)染細(xì)胞獲得的 7 個(gè)克隆,8、9 分別代表 pRcCMV/QSG細(xì)胞和 QSG7701 細(xì)胞,上圖顯示 NS3 蛋白的表達(dá),而下圖為 α-tubulin蛋白作為上樣量對(duì)照胞化學(xué)檢測(cè)28
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]人肺鱗癌組織及癌旁組織蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜的差異分析[J]. 李萃,陳主初,肖志強(qiáng),吳曉英,詹顯全,李茂玉,馮雪萍,章曉鵬,李建玲,陳平,梁宋平. 癌癥. 2004(01)
[2]肝細(xì)胞癌患者血清蛋白質(zhì)組成分的雙向凝膠電泳-飛行時(shí)間質(zhì)譜分析[J]. 王征,阮幼冰,官陽(yáng). 中華病理學(xué)雜志. 2003(04)
[3]腫瘤的HLA表達(dá)及其臨床意義[J]. 劉新,王夢(mèng)華. 微生物學(xué)雜志. 2003(03)
[4]蛋白質(zhì)組學(xué)研究的主要策略及其在腫瘤研究中的應(yīng)用[J]. 夏晴. 中國(guó)腫瘤生物治療雜志. 2003(01)
[5]肝癌與凋亡抵抗性——肝癌發(fā)病進(jìn)展中的免疫監(jiān)視逃逸機(jī)制[J]. 佐佐木裕,尹良民. 日本醫(yī)學(xué)介紹. 2003(01)
[6]MAPK/JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路研究進(jìn)展[J]. 胡智. 國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè)). 2002(04)
[7]MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路研究進(jìn)展[J]. 端木德強(qiáng),李中海,王敬澤. 細(xì)胞生物學(xué)雜志. 2002(03)
[8]丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS3對(duì)端粒酶活性的影響[J]. 歐陽(yáng)小明,程瑞雪,馮德云,鄭暉. 中華病理學(xué)雜志. 2001(06)
[9]重組人TFAR19蛋白對(duì)羥基喜樹(shù)堿誘導(dǎo)人7721肝癌細(xì)胞凋亡的增敏作用[J]. 李惠平,曹志敏,邵玉霞,孫武,賈廷珍. 北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2000(05)
[10]酪氨酸蛋白激酶抑制劑的研究進(jìn)展[J]. 周意明,孫黎光. 解剖科學(xué)進(jìn)展. 2000(03)
本文編號(hào):3495071
【文章來(lái)源】:中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】:112 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【部分圖文】:
轉(zhuǎn)染后經(jīng)G418篩選2周獲得的陽(yáng)性克隆,
測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞基因組 DNA 產(chǎn)物 M: 100bp 分子HCNS3/QSG 細(xì)胞,2: pRcCMV/QSG 細(xì)胞,32 3 4 5 6 estern Blot 檢測(cè) HCV NS3 蛋白的表達(dá)S3/QSG 轉(zhuǎn)染細(xì)胞獲得的 7 個(gè)克隆,8、9 分別SG7701 細(xì)胞,上圖顯示 NS3 蛋白的表達(dá),而
疫細(xì)圖 4. Western Blot 檢測(cè) HCV NS3 蛋白的表達(dá),1~7 分別代表pRcHCNS3/QSG 轉(zhuǎn)染細(xì)胞獲得的 7 個(gè)克隆,8、9 分別代表 pRcCMV/QSG細(xì)胞和 QSG7701 細(xì)胞,上圖顯示 NS3 蛋白的表達(dá),而下圖為 α-tubulin蛋白作為上樣量對(duì)照胞化學(xué)檢測(cè)28
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]人肺鱗癌組織及癌旁組織蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜的差異分析[J]. 李萃,陳主初,肖志強(qiáng),吳曉英,詹顯全,李茂玉,馮雪萍,章曉鵬,李建玲,陳平,梁宋平. 癌癥. 2004(01)
[2]肝細(xì)胞癌患者血清蛋白質(zhì)組成分的雙向凝膠電泳-飛行時(shí)間質(zhì)譜分析[J]. 王征,阮幼冰,官陽(yáng). 中華病理學(xué)雜志. 2003(04)
[3]腫瘤的HLA表達(dá)及其臨床意義[J]. 劉新,王夢(mèng)華. 微生物學(xué)雜志. 2003(03)
[4]蛋白質(zhì)組學(xué)研究的主要策略及其在腫瘤研究中的應(yīng)用[J]. 夏晴. 中國(guó)腫瘤生物治療雜志. 2003(01)
[5]肝癌與凋亡抵抗性——肝癌發(fā)病進(jìn)展中的免疫監(jiān)視逃逸機(jī)制[J]. 佐佐木裕,尹良民. 日本醫(yī)學(xué)介紹. 2003(01)
[6]MAPK/JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路研究進(jìn)展[J]. 胡智. 國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè)). 2002(04)
[7]MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路研究進(jìn)展[J]. 端木德強(qiáng),李中海,王敬澤. 細(xì)胞生物學(xué)雜志. 2002(03)
[8]丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS3對(duì)端粒酶活性的影響[J]. 歐陽(yáng)小明,程瑞雪,馮德云,鄭暉. 中華病理學(xué)雜志. 2001(06)
[9]重組人TFAR19蛋白對(duì)羥基喜樹(shù)堿誘導(dǎo)人7721肝癌細(xì)胞凋亡的增敏作用[J]. 李惠平,曹志敏,邵玉霞,孫武,賈廷珍. 北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2000(05)
[10]酪氨酸蛋白激酶抑制劑的研究進(jìn)展[J]. 周意明,孫黎光. 解剖科學(xué)進(jìn)展. 2000(03)
本文編號(hào):3495071
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