本文關(guān)鍵詞：PTEN基因?qū)υ缙谂咛ヮ^部神經(jīng)嵴細胞遷移的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 通過研究抑癌基因PTEN在早期雞胚中對神經(jīng)嵴細胞遷移、分化的影響，為進一步對與神經(jīng)嵴細胞遷移相關(guān)疾病的治療提供基礎(chǔ)理論支持。 方法 胚胎原位雜交：利用分子生物學方法合成chick PTEN的RNA探針，檢測PTEN在早期雞胚中尤其是神經(jīng)嵴細胞及神經(jīng)嵴前體細胞的原位表達情況。 電穿孔：我們選擇經(jīng)典的電穿孔方法來過表達PTEN突變體及野生型PTEN后用特定的神經(jīng)嵴細胞marker來檢測神經(jīng)嵴細胞遷移情況。 免疫熒光：用特異的marker，分別用HNK1和Pax7來標記神經(jīng)嵴細胞，以此來展示神經(jīng)嵴細胞的遷移情況。 神經(jīng)嵴細胞原代培養(yǎng)：為了更好地研究神經(jīng)嵴細胞及更容易對神經(jīng)嵴細胞定量，可以對神經(jīng)嵴細胞原代培養(yǎng)，進而對神經(jīng)嵴細胞遷移的面積、細胞數(shù)等等做統(tǒng)計學分析，這樣可以更清楚明了地顯示PTEN對神經(jīng)嵴細胞的影響。 結(jié)果 chick PTEN在HH4雞胚的上胚層和中胚層已開始表達，隨著胚胎發(fā)育的繼續(xù)，其在暗區(qū)及胚體均有表達。在HH9雞胚中主要表達在神經(jīng)管和神經(jīng)嵴細胞中。過表達PTEN C124S后用神經(jīng)嵴細胞特異的marker標記神經(jīng)嵴細胞后可以發(fā)現(xiàn)，PTENC124的過表達沒有造成神經(jīng)嵴細胞遷移或者神經(jīng)嵴細胞數(shù)變化，而過表達PTENWT后可以觀察到過表達側(cè)神經(jīng)嵴細胞遷移收到抑制，包括神經(jīng)嵴細胞遷移的縱向距離和橫向距離都較對照側(cè)變�。╬0.05），從背側(cè)神經(jīng)管遷出的神經(jīng)嵴細胞數(shù)也較對照側(cè)明顯變�。╬0.05）。相似地，過表達只有脂質(zhì)磷酸酶活性的PTEN Y138L也得到了和PTEN WT相似的結(jié)果。而過表達只有蛋白磷酸酶活性的PTEN G129E后，可以觀察到其對神經(jīng)嵴細胞的遷移也沒有產(chǎn)生影響，對神經(jīng)嵴細胞的細胞數(shù)也沒有產(chǎn)生影響。對神經(jīng)嵴細胞原代培養(yǎng)的結(jié)果也說明了LY294002抑制了神經(jīng)嵴細胞的遷移，這說明了PI3K信號通路調(diào)控著神經(jīng)嵴細胞遷移。 結(jié)論 過表達PTEN WT和PTEN Y138L后，，神經(jīng)嵴前體細胞的粘附分子E-cadherin會上調(diào)，進而抑制了神經(jīng)嵴細胞的遷移。這些PTEN的功能主要是由PTEN的脂質(zhì)磷酸酶活性體現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：PTEN 神經(jīng)嵴細胞 胚胎發(fā)育 細胞遷移 EMT PI3K
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R321
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 目錄7-8
• 1 前言8-15
• 1.1 神經(jīng)嵴細胞遷移9-12
• 1.2 PTEN 基因與神經(jīng)嵴細胞的遷移12-14
• 1.3 研究目的與意義14-15
• 2 實驗材料與方法15-28
• 2.1 實驗動物15
• 2.2 試劑與儀器15-16
• 2.3 實驗溶液配置16-21
• 2.4 實驗方法21-27
• 2.5 研究路線27-28
• 3. 結(jié)果28-39
• 3.1 PTEN 基因在早期胚胎及神經(jīng)嵴細胞中的表達28-30
• 3.2 PTEN 的脂質(zhì)磷酸酶活性抑制 HNK1 標記的神經(jīng)嵴細胞遷移30-33
• 3.3 PTEN 的脂質(zhì)磷酸酶活性抑制 PAX7 標記的神經(jīng)嵴細胞的遷移33-35
• 3.4 PTEN 脂質(zhì)磷酸酶活性通過上調(diào) E-CAD 的表達來抑制神經(jīng)嵴細胞的遷移35-37
• 3.5 PI3K 信號通路調(diào)控神經(jīng)嵴的遷移37-39
• 討論39-42
• 小結(jié)42-43
• 參考文獻43-46
• 英文縮略詞表索引46-47
• 在學期間發(fā)表論文清單47-48
• 致謝48

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本文編號：347904