吉蘭—巴雷綜合征源空腸彎曲菌致周圍神經病Hartley豚鼠模型建立

發(fā)布時間：2017-05-05 15:10

本文關鍵詞：吉蘭—巴雷綜合征源空腸彎曲菌致周圍神經病Hartley豚鼠模型建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：建立吉蘭-巴雷綜合征源空腸彎曲菌感染致周圍神經病Hartley豚鼠模型，為進一步探討以空腸彎曲菌為感染源，經胃腸道自然感染，引起繼發(fā)性免疫相關性疾病的發(fā)病模式，為研究吉蘭-巴雷綜合征的感染途徑，發(fā)病機制及其神經病理奠定研究模型基礎。方法： 1.培養(yǎng)空腸彎曲菌：選取河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院神經病學實驗室-80℃冰箱保存的吉蘭-巴雷綜合征（Guillain-Barre syndrome, GBS）患者分離培養(yǎng)出的空腸彎曲菌菌株lulei株，室溫溶化后取100ul菌液加入到含5ml布氏肉湯培養(yǎng)基的無菌西林瓶內，置于三氣培養(yǎng)箱，42℃微需氧（10%CO2、5%O2、85%N2）培養(yǎng)24小時。傳代至含7%無菌脫纖維羊血的哥倫比亞血平板培養(yǎng)基，相同條件培養(yǎng)24小時，純化后制備菌懸液。 2.鑒定空腸彎曲菌：革蘭染色、過氧化物試驗、馬尿酸水解試驗。 3.實驗動物分組：采用4-6周齡，體重為250-300g，雌雄各半的SPF級健康Hartley豚鼠48只,隨機分為實驗組36只和對照組(D組)12只，實驗組分為活菌灌喂組(A組)、死菌灌喂組(B組)、免疫灌喂組(C組)，每組各12只。 4.給菌途徑及濃度：實驗組動物均經口服灌喂3×108cfu/ml菌懸液2ml；對照組動物口服灌喂生理鹽水2ml，灌喂前均禁食12小時不禁水，灌胃后即給食水。 5.實驗動物觀察：自灌喂當日起每日觀察Hartley豚鼠的臨床癥狀：飲食、大便，體重及肢體活動等情況。 6.糞便培養(yǎng):各組實驗動物均于灌喂前，灌喂24小時后連續(xù)糞便培養(yǎng)、分離空腸彎曲菌。 7.解剖實驗動物：稱重后用4%水合氯醛(10ul/g)腹腔注射麻醉動物，常規(guī)皮膚消毒后打開胸腔，暴露心臟后以4%多聚甲醛灌注泵灌注，灌注后取雙側坐骨神經，臂叢神經，腦，，脊髓組織，所有組織均用4%多聚甲醛固定24小時后二次取材進行神經病理檢查，實驗結束交予河北神經病學實驗室統(tǒng)一處理實驗動物。 8.神經病理檢查：采用HE染色，免疫組化，鋨酸染色觀察神經病變。結果： 1.臨床觀察：實驗動物A3組（連續(xù)攻毒4周），A4組(連續(xù)攻毒5周)各有一只出現活動減少，食欲減退，體重減輕癥狀，占總數的5.6%（2/36）；余實驗組和對照組動物未出現明顯臨床癥狀。 2.周圍神經病變：活菌灌喂組（A組）：顯示連續(xù)灌喂2周，3周，4周各分組中3只豚鼠周圍神經均出現病理改變，表現為HE染色可見神經纖維結構多樣，軸索腫脹。免疫組織化學染色：鼠抗人神經細絲蛋白單克隆抗體示：神經絲粗細不等，節(jié)段性萎縮；兔抗人髓磷脂堿性蛋白：髓鞘厚度均一，未見脫髓鞘樣改變。鋨酸染色：可見神經皺縮、髓鞘塌陷。連續(xù)灌喂5次分組中有一只出現上述病理改變，余兩只HE染色示正常神經纖維結構，未見明顯病理改變。死菌灌喂組（B組）：各組實驗動物神經病理染色未見明顯改變。免疫灌喂組（C組）：再次免疫2周，3周實驗組中各有一只出現上述病理改變，再免4周組中3只全部出現病理改變，余未出明顯病理改變。空白對照組（D組）：各組實驗動物神經病理染色未見明顯改變。 3.糞便培養(yǎng)：各組實驗動物于實驗前糞便培養(yǎng)空腸彎曲菌均為陰性；A組實驗動物于灌喂后24小時連續(xù)每天糞便培養(yǎng)可見空腸彎曲菌，余各組實驗動物灌喂后24小時培養(yǎng)空腸彎曲菌為陰性。結論： 1.SPF級健康Hartley豚鼠胃腸道內無空腸彎曲菌。 2.吉蘭-巴雷綜合征源空腸彎曲菌口服灌喂感染Hartley豚鼠可導致周圍神經病�；罹辔菇M優(yōu)于免疫灌喂組，單純死菌灌喂Hartley豚鼠不導致周圍神經病。Hartley豚鼠可以作為吉蘭巴雷綜合癥的研究模型動物。
【關鍵詞】：空腸彎曲菌 周圍神經病 吉蘭-巴雷綜合征 Hartley 豚鼠 動物模型
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R745.43
【目錄】：